一、绿色荧光蛋白基因逆转录病毒载体转染人骨髓间充质干细胞及表达的研究（论文文献综述）
刘云[1]（2021）在《hESC衍生和组织来源间充质干细胞慢病毒转导GFP基因的特性分析》文中研究指明目的:1.用pLVX-IRES-Puro-GFP慢病毒转导人胚胎干细胞衍生的间充质干细胞、人脂肪间充质干细胞、人脐带间充质干细胞,流式细胞仪分析慢病毒对三种不同来源人间充质干细胞的转导效率。2.将成功标记绿色荧光蛋白基因的人胚胎干细胞衍生的间充质干细胞、人脂肪间充质干细胞、人脐带间充质干细胞继续传代培养,分析传代培养对绿色荧光蛋白基因阳性的细胞形态及荧光表达的影响。3.测定荧光蛋白标记前后的人胚胎干细胞衍生的间充质干细胞、人脂肪间充质干细胞、人脐带间充质干细胞的增殖、分化及细胞表型,分析慢病毒介导的绿色荧光蛋白转导对人间充质干细胞增殖、分化及细胞表型的影响,为后续干细胞体内示踪奠定基础。方法:1.用相同MOI值pLVX-IRES-Puro-GFP慢病毒转导人胚胎干细胞衍生的间充质干细胞、人脂肪间充质干细胞、人脐带间充质干细胞,流式细胞仪检测三种不同来源人间充质干细胞的慢病毒转导效率。2.将标记有绿色荧光蛋白基因的人胚胎干细胞衍生的间充质干细胞、人脂肪间充质干细胞、人脐带间充质干细胞继续培养传代,观察细胞形态的变化和绿色荧光蛋白基因的表达,流式细胞仪检测细胞增殖10代后绿色荧光蛋白阳性细胞的比例。3.对绿色荧光蛋白标记前后的细胞用CCK-8法测定细胞增殖情况,用定向诱导分化培养液进行成脂、成骨、成软骨诱导分化,油红O、茜素红、阿利新蓝染色液分别对分化后的细胞染色,流式细胞仪测定标记前后细胞表面抗原CD73、CD90、CD105、CD34、CD11b、CD19、CD45和HLA-DR的表达。结果:1.p LVX-IRES-Puro-GFP慢病毒转导人胚胎干细胞衍生的间充质干细胞、人脂肪间充质干细胞、人脐带间充质干细胞的效率存在明显差异,且差异具有显着统计学意义（P<0.01）。结果显示,人胚胎干细胞衍生的间充质干细胞慢病毒转导效率最高,其次是人脐带间充质干细胞,人脂肪间充质干细胞转导效率最低。2.标记有绿色荧光蛋白基因的人胚胎干细胞衍生的间充质干细胞、人脂肪间充质干细胞、人脐带间充质干细胞继续培养繁殖10代,倒置荧光显微镜下仍然可见几乎所有细胞均带有绿色荧光。自然光线下可见细胞贴壁成梭形,胞质丰富,细胞整体成漩涡状生长,均保持了正常良好的细胞形态,与同代数未转导干细胞比较无明显差异。3.标记有绿色荧光蛋白的人胚胎干细胞衍生的间充质干细胞、人脂肪间充质干细胞、人脐带间充质干细胞的增殖曲线和未标记细胞相近,在450nm波长下测得的OD值无统计学差异（P>0.05）,人胚胎干细胞衍生的间充质干细胞、人脂肪间充质干细胞和人脐带间充质干细胞标记绿色荧光蛋白基因后依然能分化成脂肪细胞、成骨细胞和软骨细胞,流式细胞仪测定表面抗原CD73、CD90、CD105阳性比例均在95%以上,CD34、CD11b、CD19、CD45和HLA-DR几乎不表达（<0.2%）。与同代数未转导干细胞表面抗原表达结果一致。结论:1.p LVX-IRES-Puro-GFP慢病毒转导人胚胎干细胞衍生的间充质干细胞、人脂肪间充质干细胞、人脐带间充质干细胞的效率有显着差异（P<0.01）,分析可能与间充质干细胞来源的不同或细胞增殖力差异等有关。2.标记有绿色荧光蛋白基因的人胚胎干细胞衍生的间充质干细胞、人脂肪间充质干细胞、人脐带间充质干细胞继续培养繁殖10代后细胞形态正常,且绿色荧光蛋白的表达未衰减,提示绿色荧光蛋白基因可在细胞内长期稳定表达,适用于干细胞的长期标记。3.慢病毒GFP基因转导对人胚胎干细胞衍生的间充质干细胞、人脂肪间充质干细胞、人脐带间充质干细胞的生长增殖、分化及细胞表型无不良影响,表明慢病毒介导的绿色荧光蛋白转导对细胞无毒害,且可在细胞内稳定表达,是一种理想的干细胞标记方法。
杨磊落[2]（2021）在《Wnt7a通过RUNX2调控骨髓间充质干细胞成骨分化及机制研究》文中研究指明骨髓间充质干细胞（MSCs）是潜在多能细胞,具有自我更新能力和多向分化潜能,能够分化成骨、脂肪、软骨和肌肉等。了解MSCs成骨分化的过程和分子机制,有望为骨相关疾病提供新的治疗策略。近年来,有越来越多的数据表明Wnt信号通路能对MSCs具有调节成骨细胞分化的作用。本研究旨在进一步探讨Wnt7a基因在MSCs成骨细胞分化的作用机制。研究方法1.人MSCs分离和鉴定取人骨髓组织进行原代培养,用流式细胞仪检测其表面标志物CD44、CD90、CD105、CD34、CD45,并检测 Ki67 的表达。2.体外诱导分化和Wnt7a的表达成骨诱导分化后,用茜素红对细胞染色,荧光定量RT-PCR法检测成骨分化标志物（OCN、OPN）mRNA。用成脂诱导分化后,用油红染色对细胞染色,检测成脂肪分化标志物（PPARγ、LPL）mRNA。检测上述诱导分化后细胞的Wnt7a mRNA转录和蛋白表达情况。3.慢病毒体系沉默和过表达Wnt7a基因构建慢病毒沉默和过表达Wnt7a基因转染体系,分别进行成骨分化诱导。检测上述骨分化标志物以及RUNX2和OSX的转录和表达4.Wnt7a通过表达RUNX2调控MSCs骨分化诱导各组细胞成骨分化后,用荧光素酶检测RUNX2基因上游TCF1结合位点活性,染色质免疫共沉淀实验RUNX2和TCF1与Promoter的结合情况。研究结果1.人MSCs的分离和鉴定分离培养细胞与MSCs体形态相似,CD44表达率为98.34%,CD90为99.14%,CD105为99.97%,CD34和CD45分别为1.05%和0.08%,大部分细胞带有Ki67。2.人MSCs体外分化和Wnt7a的表达成骨分化后,有大量钙性沉积生成,OCN、OPN、Wnt7amRNA转录显着升高,Wnt7a蛋白表达量显着升高。成脂分化后,有大量脂肪生成,PPARGγ和LPL的mRNA显着升高,Wnt7a mRNA转录和蛋白表达显着下降。3.沉默和过表达Wnt7a基因对MSCs的影响对Wnt7a基因沉默后,Wnt7amRNA转录和蛋白表达显着下降。诱导成骨分化后,没有钙性结节生成,OCN、OPN、Wnt7a、RUNX2 mRNA转录和蛋白表达显着下降,OSX转录和表达下降不显着。对Wnt7a基因过表达后,Wnt7amRNA转录和蛋白表达显着升高。诱导成骨分化后,大量钙性结节生成,OCN、OPN、Wnt7a、RUNX2mRNA转录和蛋白表达显着升高,OSX转录和表达下降不显着。4.Wnt7a通过表达RUNX2调节MSCs骨分化沉默Wnt7a后,Wnt7a启动子的TCF1编码区与转录因子结合的活性以及结合的蛋白显着低于对照组（P<0.05）。而过表达Wnt7a基因后,其活性和蛋白远远高于对照组（P<0.05）。研究结论1.能运用组织块消化法对人MSCs进行体外分离培养并能传代培养。在诱导成骨分化后,Wnt7a基因的转录和表达大量升高,成脂分化后,则相反。2.沉默的Wnt7a基因会导致成骨分化受阻,而过表达Wnt7a基因会促进成骨分化,说明Wnt7a参与人MSCs成骨分化。3.Wnt7a基因通过活化RUNX2基因及其启动子上游TCF1发挥促进人MSCs成骨分化的作用。
穆睿[3]（2021）在《LIM矿化蛋白1调控人牙髓干细胞复合氧化石墨烯改性支架促进组织再生研究》文中研究表明干细胞修复受损组织在组织工程和再生医学领域受到广泛的关注与研究。人牙髓干细胞（hDPSCs）来源于神经嵴细胞迁移分化的外胚层,具备快速增殖、自我更新和特定条件下分化的能力。LIM矿化蛋白1（LMP-1）是与骨发育相关的因子,在牙本质和骨组织的构建和矿化中也起着至关重要的作用。本课题拟将LMP-1慢病毒载体转染hDPSCs,探索其对细胞定向分化的影响及潜在的调控机制。生物材料是组织工程必不或缺的要素之一。明胶海绵（GS）是一种可吸收天然高分子生物材料,因具备良好的生物相容性受到广泛应用,但由于其力学性能过低及降解过快,无法为新生组织提供足够的生长空间和时间。氧化石墨烯（GO）为石墨烯的氧化衍生物,表现出优异的亲水性和生物活性。本课题拟将GO与GS结合形成复合支架,有望改善GS的各项理化性能和生物学性能,更好的促进组织再生。目的:探索LMP-1低表达和过表达对hDPSCs的增殖及分化能力的影响,初步明确LMP-1调控hDPSCs定向分化的MAPKs通路机制。同时,将GO与GS相结合构建复合生物支架,复合LMP-1转染的hDPSCs,植入体内探索组织再生情况,评价该方案在组织工程和再生医学领域中的发展潜力。方法:利用LMP-1慢病毒载体转染hDPSCs,通过CCK-8法绘制转染后细胞的生长曲线;通过碱性磷酸酶（ALP）活性和茜素红染色检测转染后细胞的矿化能力;利用蛋白质印迹法（western blot）和实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测转染后细胞中矿化相关基因和蛋白表达水平情况,并通过western blot检测MAPK通路蛋白的磷酸化水平及矿化相关蛋白的变化。采用改良Hummers法合成GO,通过扫描电镜、透射电镜、傅里叶红外光谱仪等对GO进行理化性能检测;利用浸渍涂膜法,将少层GO均匀的涂覆在GS表面制备形成复合支架,检测复合支架的表面形貌、理化性能以及其对细胞生物学特性的影响。将LMP-1转染的hDPSCs接种至GO/GS复合支架上,移植入裸鼠背部皮下,评价在体内环境下新生组织的形成情况。结果:体外细胞实验表明,LMP-1可以调控hDPSCs的矿化,并且ERK1/2和p38 MAPK信号通路可能参与了此调控过程。GO的涂覆有效地改善了 GS支架的理化性能和生物学性能。同时,LMP-1可以诱导hDPSCs在体内环境中的生长和矿化,形成基质及成牙本质/骨样组织,伴有血管生成,并增强矿化相关生物标志DSPP、OCN和ALP的表达。结论:本研究将LMP-1转染hDPSCs后与GO/GS支架复合形成细胞与支架复合体,在组织工程和再生医学领域表现出较大的潜力。
李艾[4]（2021）在《氧化铁纳米粒改良的间充质干细胞载体构建及用于脑胶质瘤的靶向治疗研究》文中认为目的:本论文采用新型的氧化铁纳米材料来改良天然间充质干细胞（Mesenchymal stem cells,MSCs）载体,在实现对MSCs高效自杀基因重组的同时,利用氧化铁纳米粒降解后的产生的铁离子刺激MSCs上间隙连接蛋白（Connexin,Cx）43的过表达,促进活化的前药代谢物通过间隙连接通道向肿瘤细胞的转运,最终实现对脑胶质瘤细胞的高效选择性旁观者效应杀伤作用,为脑胶质瘤的自杀基因治疗提供一种基于改良干细胞载体的新策略。方法:1.构建基于氧化铁纳米组装链（Magnetosome-like ferrimagnetic iron oxide nanochains,MFIONs）的转染体系用于MSCs高效携载和表达编码单纯疱疹病毒胸苷激酶（Herpes simplex virus thymidine kinase,HSV-tk）自杀基因的质粒DNA（plasmid DNA,p DNA）,通过考察表达HSV-tk自杀基因的MSCs（MSCs-tk）的体外死亡率评价自杀效应的效率,筛选获得最优的自杀效应条件;2.通过对MSCs-tk与共培养的C6脑胶质瘤细胞的细胞总死亡率和C6脑胶质瘤细胞的单独死亡率评价体外旁观者效应;3.考察经MFIONs转染后的MSCs的Cx43蛋白表达水平及经MFIONs转染后的MSCs与C6脑胶质瘤细胞间的细胞间隙连接通讯（Gap junctional intercellular communication,GJIC）功能,研究经MFIONs转染后MSCs的Cx43蛋白过表达与其旁观者效应之间的作用关系和作用机制;4.采用体外迁移实验及体内荧光示踪技术考察经MFIONs转染后的MSCs对C6脑胶质瘤细胞的体内外靶向效率;5.通过体内治疗实验评价经MFIONs转染后的MSCs作为自杀基因HSV-tk的靶向递送载体对脑胶质瘤的抑制效果,并初步考察该传递载体用于自杀基因治疗的安全性。结果:1.基于MFIONs的转染体系可以在MSCs上实现高效的基因转染,且在适宜的MFIONs浓度下没有引起明显的细胞毒性。经MFIONs转染HSV-tk自杀基因的MSCs-tk显示出良好的体外自杀效应,最优的自杀条件为连续5天给予浓度为200μg/m L的更昔洛韦（Ganciclovir,GCV）溶液;2.经MFIONs转染的MSCstk显示出良好的旁观者效应,可在体外实现对C6脑胶质瘤细胞的有效杀伤,其作用机制除了依赖于MSCs-tk高效表达自杀基因,有效活化前药为肿瘤细胞毒性药物外,还与MFIONs促进MSCs载体与C6脑胶质瘤细胞间通过GJIC的药物传递有关;3.体外迁移实验中,经MFIONs转染的MSCs载体显示出对C6脑胶质瘤细胞明显的趋向能力;在原位脑胶质瘤大鼠模型的体内,尾静脉注射的经MFIONs转染的MSCs显示出对脑部胶质瘤的高效靶向归巢能力,并可较好的侵袭入胶质瘤组织深部;4.体内治疗实验结果显示,经MFIONs转染后的MSCs载体可以携载HSV-tk自杀基因在体内实现对脑胶质瘤的有效治疗,显着促进脑胶质瘤细胞凋亡,抑制脑胶质瘤组织生长,延长荷瘤大鼠的生存期;5.体内初步安全性评价实验结果显示,通过该传递系统进行自杀基因治疗只对肺组织产生轻微的毒性,对正常脑组织及体内其他主要脏器无明显毒副作用。结论:采用氧化铁纳米材料不但可以高效转染MSCs,实现对自杀基因的高效携载和表达,还能促进MSCs与肿瘤细胞间通过GJIC的药物传递,提高HSVtk/GCV自杀基因疗法的旁观者效应。因此有望成为一种潜在的干细胞改良手段,实现干细胞作为自杀基因的传递载体对肿瘤的高效靶向治疗。
李君[5]（2021）在《构建miR-378a修饰的BMMSCs膜片的成骨和成血管性能的体外实验研究》文中指出目的:通过研究过表达miR-378a基因递送至SD大鼠骨髓间充质干细胞（BMMSCs）膜片的可行性及对膜片成骨及成血管分化能力的影响与作用机制,探讨miR-378a作为骨组织工程基因治疗潜在工具的可行性及其对骨缺损修复的影响。方法:分离培养SD大鼠BMMSCs并鉴定其表型及定向分化能力;预实验摸索慢病毒载体（LV）转染BMMSCs的最佳感染条件,选用合适滴度的miR-378a慢病毒载体（LV-miR-378a）和空载慢病毒（LV）感染BMMSCs,通过流式细胞术、激光共聚焦显微镜检测慢病毒转染效率;CCK-8法检测慢病毒感染BMMSCs后的细胞毒性;然后对转染后的BMMSCs进行成膜及成骨诱导培养,分别于3、7、14天时通过倒置显微镜观察膜片形态,进行碱性磷酸酶（ALP）染色和RT-PCR检测,并于14天时进行Western blot检测成骨及成血管相关指标的表达水平。结果:（1）流式和激光共聚焦结果显示:慢病毒转染BMMSCs完成后绿色荧光蛋白EGFP表达无明显差异,CCK-8结果提示,与空白组及LV-BMMSCs组比较,LV-miR-378a-BMMSCs组细胞增殖速度加快;（2）成膜诱导2d、6d时,3组BMMSCs膜片镜下的形态学变化无明显差异,3组膜片进行成骨诱导3d、7d、14d后均发生成骨分化现象,ALP染色结果显示,各时间段的LV-miR-378a-BMMSCs组黑色沉淀物数量最多、颜色最明显;（3）RT-PCR结果表明,从基因m RNA水平上,与空白组及LV-BMMSCs组比较,LV-miR-378a-BMMSCs组的成骨及成血管分化相关基因Runx相关转率因子2（Runx2）、I型胶原（COLI）、血管内皮生长因子（VEGF）、血小板衍生生长因子（PDGF）均明显升高（P<0.001）;（4）Western blot结果表明,在蛋白水平上,LV-miR-378a-BMMSCs组膜片可合成更多的Runx2和VEGF蛋白,明显高于空白组（P<0.01）及LV-BMMSCs组（P<0.001）。结论:过表达miR-378a慢病毒载体可递送至BMMSCs膜片中,同时可以在一定程度上增强BMMSCs的增殖和BMMSCs膜片的骨生成及血管生成能力。
张骏[6]（2020）在《FGF-2慢病毒载体介导的人羊膜间充质干细胞复合兔自体富血小板血浆促进腱—骨愈合的实验研究》文中研究指明目的:（1）探索不同浓度的FGF-2溶液对人羊膜间充质干细胞（Human amniotic mesenchymal stem cells,hAMSCs）向韧带和骨诱导的效果。（2）探究FGF-2慢病毒载体转染后的hAMSCs复合兔自体富血小板血浆（Platelet rich plasma,PRP）促进腱-骨愈合的可行性。方法:（1）通过酶消化法（2次胰酶消化,1次II型胶原酶消化）提取hAMSCs,连续传代培养,显微镜下观察hAMSCs的细胞形态,hAMSCs传至第三代（P3代hAMSCs）可用于后续实验;通过免疫荧光和流式细胞术对P3代hAMSCs进行鉴定。（2）用不同浓度（0,10,20,40 ng/ml）的FGF-2溶液对P3代hAMSCs进行诱导,CCK8法检测不同浓度的FGF-2溶液对hAMSCs增殖的影响;诱导14天后,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测不同浓度的FGF-2溶液诱导后的hAMSCs韧带和成骨相关基因的表达情况;Western Blot/免疫荧光检测不同浓度的FGF-2溶液诱导后的hAMSCs韧带和成骨相关蛋白的表达;天狼猩红染色检测不同浓度的FGF-2溶液诱导后的hAMSCs胶原表达情况。通过FGF-2慢病毒载体转染P3代hAMSCs,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达情况,qRT-PCR和Western Blot检测病毒的转染效率。（3）通过两次离心法制备兔自体PRP,并用牛凝血酶/Cacl2将PRP激活。（4）制备兔关节外腱-骨愈合模型:用3%戊巴比妥钠对新西兰大白兔进行麻醉（按0.5mL/kg的剂量）,麻醉后进行备皮、消毒铺巾,在左后腿跟骨处向上切开皮肤,充分暴露跟腱,取一约2cm长的跟腱备用。在右侧胫骨上端内侧逐层切开皮肤,充分暴露胫骨上端,距胫骨上端约2cm处用口腔钻钻一直径为2.5mm的骨隧道,将取下的跟腱移植到骨隧道里,跟腱的两端分别留约0.5cm,并将其固定在周围的软组织上,以便术后取材和生物力学检测。跟腱移植到骨隧道固定后分别做以下处理:第一组:未做特殊处理（对照组）;第二组:在骨隧道里注射自体激活的PRP（PRP组）;第三组:将自体PRP与hAMSCs混合并激活后注射到骨隧道里（PRP+hAMSCs组）;第四组:将自体PRP与FGF-2慢病毒载体转染的hAMSCs混合并激活后注射到骨隧道里（PRP+FGF-2-hAMSCs组）。逐层缝合切口,再次消毒,术后连续7天肌肉注青霉素20万U/只预防感染。术后3个月处死动物,取胫骨-移植物复合物进行大体观察、组织学检测（HE染色、番红固绿染色、甲苯胺蓝染色、Masson三色染色、天狼猩红染色）、影像学检测、生物力学检测观察腱-骨愈合情况。结果:（1）原代hAMSCs呈圆形或椭圆形贴壁生长,经过传代培养后逐渐呈涡旋状贴壁生长。免疫荧光结果提示:P3代hAMSCs高表达波形蛋白,不表达Cytokeratin 19（CK19）;流式细胞术结果提示:P3代hAMSCs高表达间充质干细胞的表型分子CD44、CD73、CD90、CD105,几乎不表达CD19、CD34、CD45、CD11B、HLA-DR。（2）不同浓度的FGF-2溶液诱导hAMSCs后,CCK8结果提示:各组细胞增殖均呈S型曲线,10 ng/ml的FGF-2诱导组细胞增殖速度较对照组未见明显变化,而20 ng/ml和40 ng/ml的FGF-2诱导组其增殖能力较对照组明显提高,其中以40ng/ml最为明显。诱导后14天,qRT-PCR结果提示:不同浓度的FGF-2诱导组韧带和成骨相关基因表达明显上调,其中10 ng/ml的FGF-2诱导组韧带和成骨相关基因上调最明显;Western Blot/免疫荧光结果提示:不同浓度的FGF-2诱导组韧带和成骨相关蛋白表达明显上调,其中10 ng/ml的FGF-2诱导组韧带和成骨相关蛋白上调最明显;天狼猩红染色结果提示:各组细胞均可见胶原的分泌,胶原主要围绕着细胞核在细胞浆中分泌,对照组可见少量的胶原分泌,不同浓度的FGF-2诱导组胶原分泌明显高于对照组,其中10 ng/ml的FGF-2诱导组其胶原分泌最大,成网状排列。将FGF-2慢病毒载体以最适感染复数（MOI=50）转染P3代hAMSCs,24h后可见慢病毒转染组和空载质粒组有绿色荧光蛋白的表达,96h后绿色荧光蛋白的表达最强烈且稳定,未转染组在各个时间点均未见绿色荧光蛋白的表达;qRT-PCR和Western Blot结果提示:慢病毒转染组其FGF-2mRNA和蛋白的表达水平明显高于空载质粒组和未转染组（P<0.05）,而空载质粒组和未转染组FGF-2 mRNA和蛋白的表达水平无统计学差异（P>0.05）。（3）将兔耳源静脉血第一次离心后,全血分三层,上层为血浆层、中间层为PRP层、下层为细胞层（红细胞）。将上层的血浆、中间的PRP及下层的细胞上面2mm转移至新的离心管再次离心后,PRP沉积在离心管的底部。将第二次离心后上面3/4的血浆去掉,保留下面1/4的PRP。此时的PRP是液体状,其内的各种生长因子含量少且活性较低。加入激活剂后（牛凝血酶/Cacl2）,可将活性较低的PRP激活,使其由液体状变为凝胶状,此时的PRP具有较强的生物学活性,其内的大量生长因子被激活。（4）术后3个月,对照组移植物与骨隧道之间可见明显的间隙,并且骨隧道周围能够见到异常增生的组织;PRP组和PRP+hAMSCs组移植物和骨隧道之间的间隙较对照组有逐渐缩窄的趋势,但是其骨隧道周围组织的颜色和光泽较正常组织有明显的差别;PRP+FGF-2-hAMSCs组移植物和骨隧道之间的间隙几乎消失,骨隧道周围的色泽接近于正常的组织。组织学检测结果提示:PRP+FGF-2-hAMSCs组移植物和骨隧道之间几乎看不到间隙,无炎性细胞的存在,可见新生的纤维软骨,并且还可以看到大量排列整齐的胶原纤维,其腱-骨愈合情况优于其他各组。影像学结果提示:各组骨隧道均可见新生骨痂的形成,PRP+FGF-2-hAMSCs组其骨隧道直径较其他各组均明显降低。生物力学检测结果提示:PRP+FGF-2-hAMSCs组其力学强度明显高于其他各组。结论:（1）成功分离培养hAMSCs。（2）通过两次离心法成功制备了兔自体PRP。（3）FGF-2慢病毒载体介导的hAMSCs复合兔自体PRP能够促进兔腱-骨愈合。
汤娅[7]（2020）在《氧化应激状态下骨髓间充质干细胞过表达Nrf2基因与心肌微血管内皮细胞共培养的实验研究》文中研究指明研究背景:急性心肌梗死（Acute myocardial infarction,AMI）是临床最常见的心血管急危重症,也是心源性猝死的最主要原因之一。尽管再灌注治疗心肌梗死具有一定的疗效,但由于心肌细胞的不可再生性,大面积心肌细胞坏死后继发缺血性心肌病,导致心脏扩大与心功能下降,最终发展为心力衰竭。因此,寻求一种更为有效的治疗方法成为研究学者的重要任务。近年来,干细胞移植治疗急性心肌梗死获得了广泛的基础研究,其中骨髓间充质干细胞（Bone Mesenchymal Stem Cells,BMSCs）移植治疗心肌梗死颇受青睐。但由于心肌梗死后缺血缺氧的微环境,致使移植的BMSCs存活率以及滞留率受到了极大的限制。前期研究表明,基因修饰可提高细胞的存活率及生物学功能。核因子相关因子-2（Nuclear factor-erythroid 2-Reated Factor 2,Nrf2）是机体抗氧化反应的最重要调节因子之一,氧化应激状态下可激活下游多种抗氧化基因和Ⅱ相解毒酶基因的转录和表达,如血红素氧化酶-1（Heme Oxygenase-1,OH-1）等。本实验拟在氧化应激状态下在BMSCs中过表达Nrf2的水平,试图提高心肌梗死后缺血缺氧环境下移植BMSCs的存活率,进而提高移植细胞的生物学功能。新生血管的形成对心肌梗死后心功能恢复至关重要。血管生成是由现有的血管内皮细胞（Vascular Endothelial Cells,VECs）生成新的血管,涉及内皮细胞的激活,增殖和迁移等,其中心肌微血管内皮细胞（Cardiac Microvascular Endothelial Cells,CMECs）与心肌血管生成密切相关。本研究拟利用在过氧化氢（Hydrogen Peroxide,H2O2）诱导BMSCs凋亡的基础上,观察在BMSCs中过表达Nrf2基因,与CMECs建立体外共培养模式,模拟细胞内微环境,探讨共培养体系下BMSCs通过旁分泌作用对CMECs血管新生能力的影响,为干细胞的治疗提供新的治疗靶向与策略。第一部分Nrf2/HO-1/NQO1轴在过表达Nrf2基因的BMSCs凋亡中的作用以及机制目的:（1）培养实验所需的BMSCs并选取P3代BMSCs加以其表面分子的鉴定并构建大鼠慢病毒载体Nrf2基因过表达以及沉默转染稳定细胞株;（2）观察在300μmol/L H2O2处理BMSCs 4h诱导BMSCs凋亡的氧化应激基础上,过表达Nrf2基因对BMSCs增殖和凋亡的影响;（3）氧化应激状态下,探讨Nrf2/HO-1/NQO1信号通路在氧化应激状态下抑制BMSCs凋亡的影响。方法:（1）采用全骨髓贴壁法培养实验所需的BMSCs并采用流式细胞术（FCM）检测BMSCs表面标记抗原（CD90和CD45）;（2）分别使用倒置荧光显微镜、qRT-PCR以及Western Blot法检测慢病毒转染Nrf2基因至P3代BMSCs成功;（3）经H2O2建立BMSCs氧化应激模型:采用FCM检测不同浓度H2O2（0、100、200、300、400μmol/L）处理4h对BMSCs的影响,选取最佳的H2O2浓度作为诱导BMSCs最佳的凋亡模型,作为后续实验的处理条件。实验分为5组,分别为:空白对照组（Control组）、Nrf2沉默空载体组（Nrf2-Vector组）、Nrf2沉默组（si-Nrf2组）、Nrf2过表达空载体组（Nrf2-Scramble组）、Nrf2过表达组（LV-Nrf2组）;（4）Edu以及流式细胞周期检测各组BMSCs的增殖能力;（5）Tunel以及FCM检测各组BMSCs的凋亡情况;（6）Western Blot检测各组BMSCs中抗氧化相关蛋白Nrf2、HO-1及NQO1的表达水平。结果:（1）P0代BMSCs原代细胞培养至第3天,细胞有触角伸出,细胞形态多数呈多角形、棱形,少部分呈现条索状,细胞为成簇状团状生长,胞浆内有颗粒状结构分布;培养至第7天,原代细胞长满80%90%,即可开始传代培养。传代后细胞进入快速生长期,第3代细胞形态均一,呈鱼群状。用FCM鉴定,第3代SD大鼠BMSCs CD90阳性表达（97.18%）,而CD45弱表达（3.36%）。（2）当MOI=150时,慢病毒转染BMSCs 48h后,倒置荧光显微镜下可见少量绿色荧光表达,转染72h后,绝大多数细胞呈现出绿色荧光;用qRT-PCR以及Western Blot检测:LV-Nrf2组Nrf2表达明显上调（P<0.05）;si-Nrf2组Nrf2表达明显下调（P<0.05）。（3）300μmol/L H2O2处理BMSCs 4h作为诱导BMSCs凋亡的最佳浓度和时间,用于体外模拟心肌梗死后氧化应激微环境。（4）Edu以及流式细胞周期检测结果显示:si-Nrf2组BMSCs增殖率显着下调（P<0.01）;LV-Nrf2组BMSCs的增殖率显着上调（P<0.01）。（5）Tunel以及FCM检测各组凋亡率,结果显示si-Nrf2组BMSCs总体凋亡率显着上调（P<0.01）;LV-Nrf2组BMSCs的总体凋亡率显着下调（P<0.01）。（6）Western Blot结果显示:LV-Nrf2组抗氧化相关蛋白Nrf2、HO-1及NQO1的相对表达量显着上调（P<0.01）;si-Nrf2组抗氧化相关蛋白Nrf2、HO-1及NQO1的相对表达量显着下调（P<0.01）。结论:（1）利用全骨髓贴壁法可有效的培养出实验所需的、纯度较高的BMSCs。（2）当MOI=150、转染72h时,慢病毒转染BMSCs可获得稳转株细胞。（3）300μmol/L H2O2处理BMSCs 4h是诱导BMSCs凋亡的最佳浓度和时间。（4）氧化应激环境下,过表达Nrf2基因促进BMSCs增殖,抑制BMSCs凋亡。（5）氧化应激环境下,过表达Nrf2可有效增加抗氧化相关蛋白Nrf2、HO-1以及NQO1的表达水平。第二部分Nrf2/HO-1/NQO1轴在抑制骨髓间充质干细胞（BMSCs）凋亡及共培养后促进心肌微血管内皮细胞（CMECs）血管新生中的作用及机制研究目的:本实验的目的在于通过采用Transwell小室体外建立BMSCs与CMECs间接共培养体系,探讨过表达Nrf2基因的BMSCs通过其旁分泌作用对CMECs生物学的影响。以单独完全培养基培养的CMECs为阴性对照组,探讨共培养方式下Nrf2基因转染的BMSCs对CMECs血管新生的影响以及探讨Nrf2/HO-1/NQO1信号通路在其中的作用。方法:实验分为6组,NC组（单独CMECs培养组）、Control-BMSCs组（未转染病毒的BMSCs与CMECs共培养组）、Nrf2-Vector-BMSCs组（转染Nrf2沉默空载体的BMSCs与CMECs共培养组）、si-Nrf2-BMSCs组（转染沉默Nrf2基因的BMSCs与CMECs共培养组）、Nrf2-Scramble-BMSCs组（转染Nrf2过表达空载体的BMSCs与CMECs共培养组）以及LV-Nrf2-BMSCs组（转染过表达Nrf2基因的BMSCs与CMECs共培养组）,利用Transwell小室（膜孔直径0.4μm）体外建立BMSCs--CMECs共培养体系。（1）分别检测各组CMECs的血管新生能力,即Transwell小室（膜孔直径8.0μm）检测CMECs的迁移能力;（2）基质胶检测CMECs的成管能力;（3）Edu以及流式细胞周期检测CMECs的增殖能力;（4）Tunel检测CMECs的凋亡情况;（5）Western Blot检测各组CMECs中抗氧化相关蛋白Nrf2、HO-1及NQO1的表达水平。结果:（1）Transwell小室结果显示:五组共培养体系中CMECs的迁移能力明显高于单独CMECs培养组（P<0.01）;与Control-BMSCs组相比,LV-Nrf2-BMSCs组结晶紫染色阳性的跨Transwell小室膜迁移的CMECs数量显着升高（P<0.01）;si-Nrf2-BMSCs组结晶紫染色阳性的跨Transwell小室膜迁移的CMECs数量显着降低（P<0.01）。（2）基质胶结果显示:五组共培养体系中CMECs的小管形成能力明显高于单独CMECs培养组（P<0.01）;与Control-BMSCs组相比,LV-Nrf2-BMSCs组小管形成能力显着增加（P<0.01）;si-Nrf2-BMSCs组小管形成能力显着减少（P<0.01）。（3）Edu结果显示:五组共培养体系中CMECs的Edu紫色荧光阳性细胞数比例明显高于单独CMECs培养组（P<0.01）;与Control-BMSCs组相比,LV-Nrf2-BMSCs组Edu紫色荧光阳性细胞数比例明显上调（P<0.01）;si-Nrf2-BMSCs组Edu紫色荧光阳性细胞数比例显着下调（P<0.01）。（4）细胞周期结果显示:五组共培养体系中CMECs的增殖率显着高于单独CMECs培养组（P<0.01）;与Control-BMSCs组相比,LV-Nrf2-BMSCs组CMECs增殖明显增强（P<0.01）;si-Nrf2-BMSCs组CMECs增殖率显着减弱（P<0.01）。（5）Tunel结果显示:五组共培养体系中CMECs凋亡率明显低于单独CMECs培养组（P<0.01）;与Control-BMSCs组相比,LV-Nrf2-BMSCs组CMECs凋亡率明显降低（P<0.01）;si-Nrf2-BMSCs组CMECs凋亡率显着升高（P<0.01）。（6）Western Blot结果显示:五组共培养体系CMECs中抗氧化相关蛋白Nrf2、HO-1及NQO1的表达水平高于单独CMECs培养组（P<0.01）;与Control-BMSCs组相比,LV-Nrf2-BMSCs组CMECs中抗氧化相关蛋白Nrf2、HO-1及NQO1的表达水平显着上调（P<0.01）;si-Nrf2-BMSCs组CMECs中抗氧化相关蛋白Nrf2、HO-1及NQO1的表达水平显着下调（P<0.05）。结论:（1）CMECs免疫荧光鉴定CD31以及Ⅷ因子呈阳性表达。（2）与BMSCs共培养可以促进CMECs的增殖、迁移以及血管新生能力,降低CMECs的凋亡。（3）与未转染的BMSCs相比,Nrf2基因转染可以增强共培养对CMECs的增殖、迁移、血管新生以及抗凋亡能力的影响。（4）过表达Nrf2可有效增加抗氧化相关蛋白Nrf2、HO-1以及NQO1的表达水平。
杨显红[8]（2020）在《静脉注射hBMP-2基因转染ADSCs干预兔骨质疏松性骨折的实验研究》文中研究说明目的:静脉注射用腺病毒载体转染人骨形态发生蛋白2（hBMP-2）基因的脂肪干细胞（ADSCs）于兔骨质疏松性骨折（OPF）模型体内,观察其对骨折愈合的修复作用。方法:1在新西兰大白兔颈项部提取适量脂肪组织,分离传代培养ADSCs至第3代。用腺病毒载体将hBMP-2基因转染至转染ADSCs组干细胞内,荧光显微镜下观察转染效率。10 d后逆转录酶聚合酶链反应法（RT-PCR）检测hBMP-2mRNA的表达水平,采用蛋白印迹杂交法（WB）检测hBMP-2蛋白的表达情况。2 48只新西兰大白兔采用双侧卵巢去势法,联合右侧股骨中下段2 mm骨缺损骨折法制备兔OPF模型。造模后随机分组法分为3组:转染干细胞组（16只,简称转染组）、未转染干细胞组（16只,简称空载组）、对照组（16只）;造模术后第3天开始静脉移植干细胞,每天1次,共3天。各组在移植后4周和8周时间点进行免疫组织化学法（IHC-P）检测血清骨生化4项;用X线摄片半定量评分法比较各组兔子骨质大体形态修复程度;HE染色方法了解各组兔子骨组织的病理变化;转染组行共聚焦显微镜示踪检测荧光标记蛋白表达情况,评估干细胞移植归巢效果。结果:1分离、转染细胞从兔颈项部脂肪组织成功分离出ADSCs,用腺病毒载体将hBMP-2基因转染于ADSCs,转染后培养72 h时,细胞荧光效果增强;10 d后,转染率达87%。RT-PCR检测转染ADSCs组内hBMP-2mRNA相对表达较ADSCs组及空白组显着增高（P<0.01）;WB检测发现转染ADSCs组hBMP-2蛋白表达显着高于ADSCs组及空白组（P<0.05）。2去势后兔腰椎骨密度（BMD）检测在去势24周时骨密度丢失较去势前超过25%（P<0.05）,差异具有统计学意义。3血清ELISA检测骨生化4项转染组、空载组抗酒石酸酸性磷酸酶5b（TRACP-5b）、骨碱性磷酸酶（BAP）、骨钙素N端中分子片段（N-MID OC）蛋白在第8周时实验组较对照组均有下降（P<0.05）,转染组较空载组下降明显（P<0.05）,差异有统计学意义。转染组、空载组25-羟基维生素D（25-（OH）-VD）蛋白在第4周及第8周较对照组均上升（P<0.05）,转染组较空载组在第4周时升高,差异无统计学意义（P>0.05）,转染组在第8周时较空载组有显着升高（P<0.05）。4 X线摄片半定量评分4周时转染组大白兔右侧股骨干骨折端有大量骨痂形成;空载组骨折处可见外骨痂生长;对照组骨折端可见清晰骨折线。8周时转染组骨折线消失;空载组有较多外骨痂形成;对照组出现大量外骨痂,仍可见部分骨折线迹象。X线半定量评分:4周时转染组与空载组评分较对照组有升高（P<0.05）,转染组评分较空载组有显着升高（P<0.05）。8周时,转染组评分显着高于空载组（P<0.05）,转染组及空载组高于对照组（P<0.05）。5 HE染色4周时转染组可见较多破骨细胞;空载组骨小梁生长稀疏,破骨细胞少,对照组见少许骨小梁生长,见极少破骨细胞。8周时转染组骨小梁排列有序,形成哈夫斯管;空载组见少量哈夫斯管形成,密度不均;对照组骨小梁排列错乱,见较多破骨细胞生长。6激光共聚焦显微镜示踪检测在转染组大白兔干细胞移植4周时可见兔骨折处有绿色免疫荧光蛋白表达,而在同只实验兔对侧（左侧/健侧）股骨相同部位仅有极少量荧光蛋白表达。移植8周后可见右侧股骨骨折处仍有免疫荧光,健侧骨组织未见荧光蛋白表达。结论:静脉注射hBMP-2基因转染的ADSCs可有利于促进兔OPF愈合修复。
阮晨梅[9]（2020）在《Pdx1、Ngn3、Mnx1、Mafa和Pax4组合转染诱导犬ADSCs向IPCs分化的研究》文中进行了进一步梳理目前,通过对胰岛β细胞发育调控基因重编程使脂肪间充质干细胞具有胰岛素分泌功能,从而代替胰岛β细胞用于糖尿病治疗已成为一大研究热点。基因Pdx1、Ngn3、Pax4、Mafa等是胰腺发育的主要调控基因,它们的突变缺失都会严重破坏胰腺内分泌细胞的发育。通过转基因技术使这些基因在干细胞中过表达,但结果发现单基因转染的定向诱导作用并不明显,要实现干细胞向胰岛素分泌阳性细胞的定向分化还需要其他基因的配合,进而筛选最佳基因组合并通过多基因共表达实现干细胞向胰岛素分泌细胞分化具有重要意义。前期本研究小组已通过绝对定量转录组测序分析筛选出在犬ADSCs向胰岛素分泌阳性细胞分化中可能起作用的新表达调控基因Foxa2、Insm1和Mnx1。因此,本试验前期构建了基因Foxa2、Insm1和Mnx1的真核过表达载体和腺病毒过表达载体,并对其在犬ADSCs中的过表达功能进行验证,对比筛选出功能最佳的新表达调控基因Mnx1。此外,试验中发现真核表达载体筛选周期长,筛选效率低,而腺病毒过表达载体操作简单,感染效率高。因此后期实验中,将基因Mnx1与级联调控关键基因Pdx1、Ngn3、Pax4、Mafa以2A肽连接,以不同的排列形式构建5组腺病毒介导的多基因共表达载体,包装扩增为高滴度的腺病毒毒液后感染犬脂肪间充质干细胞并对分化效果进行监测。研究结果如下:1. 成功构建重组真核过表达载体pIRES2-EGFP-Foxa2、pIRES2-EGFP-Insm1、pIRES2-EGFP-Mnx1和重组腺病毒过表达载体pAd-Foxa2、pAd-Insm1、pAd-Mnx1,并经PCR鉴定和双酶切鉴定。分别感染犬ADSCs后对比各时间段胰岛β细胞发育调控基因m RNA表达量,显示腺病毒介导的基因Mnx1过表达可显着提高胰岛β细胞发育调控基因Pdx1、Ngn3、Mnx1、Nkx2.2、Nkx6.1、Gata4在犬ADSCs中的表达水平,并发现腺病毒的感染效率明显高于真核过表达载体。2. 成功构建五组多基因共表达腺病毒载体pAd-Pdx1-E2A-Ngn3、pAd-Pdx1-E2A-Ngn3-P2A-Mnx1、pAd-Pdx1-E2A-Ngn3-P2A-Mafa-F2A-Mnx1、pAd-Pdx1-E2A-Ngn3-P2A-Pax4-E2A-Mnx1、pAd-Pdx1-E2A-Ngn3-P2A-Mafa-F2A-Pax4。经过酶切、PCR鉴定和测序正确。通过RT-q PCR和Western blot检测发现各组合中目的基因在m RNA水平和蛋白水平都有明显表达。3. 五组多基因共表达腺病毒载体包装扩增后感染犬ADSCs,荧光定量PCR结果显示组合三中基因Pdx1、Ngn3、Mafa和Mnx1共表达后,胰岛β细胞发育调控基因Pdx1、Mafa、Nkx2.2、Nkx6.1、Gata4、Ins、Pcsk2、Slc30a8、Abcc8、Ksnj8、G6pc2表达量显着提高,与其他组合相比差异性显着。感染25 d后形成的类圆形细胞团双硫腙染色后呈现红棕色,提示有胰岛素分泌。组合三腺病毒感染的犬ADSCs在高糖（25 mmol/L）和低糖（5 mmol/L）刺激下,上清液中胰岛素分泌量分别是101.810±4.39μIU/105cells和49.439±2.5μIU/105cells,其胰岛素刺激释放指数（Stimulation Index,SI）为2.059±0.175,与其他几组呈现显着性差异。结果表明,基因Mnx1过表达可显着提高胰岛β细胞发育调控基因Pdx1、Ngn3、Mnx1、Nkx2.2、Nkx6.1、Gata4在犬ADSCs中的表达水平。腺病毒的感染效率明显高于真核过表达载体。腺病毒介导基因Pdx1、Ngn3、Mafa和Mnx1在犬脂肪间充质干细胞中共表达,可高效调控其向胰岛素分泌阳性细胞分化,为进一步探究糖尿病的干细胞替代疗法奠定了基础。
赵璐[10]（2020）在《IL-10基因修饰脂肪间充质干细胞对兔自身免疫性干眼免疫调控作用的实验研究》文中提出目的干燥综合征（Sj?gren’s syndrome,SS）是一种慢性自身免疫性干眼类型,主要侵犯唾液腺和泪腺,表现为口、眼干燥,病情严重者可最终丧失功能视力,极大的影响人们的生活质量。SS发病机制尚未完全明确,目前仍缺乏有效的治疗方法。间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）是来源于中胚层的多能干细胞,具有低免疫原性及免疫抑制特性,已用于系统性红斑狼疮（Systemic Lupus Erythematosus,SLE）、类风湿关节炎（Rheumatoid Arthritis）等多种自身免疫性疾病的临床治疗。近年大量研究表明,过表达白细胞介素10（interleukin10,IL-10）基因可显着增强MSCs对疾病的治疗效能,为难治性自身免疫性疾病的治疗带来了新的转机,但应用慢病毒介导IL-10基因感染MSCs对自身免疫性干眼的免疫调节机制研究尚未见报道。本研究将通过兔抗原T细胞诱导的自身免疫性干眼模型,探究发病早期静脉输注IL-10-ADSCs对干眼发病进程的影响,并初步探索IL-10-ADSCs在自身免疫性干眼中的免疫调节机理,为自身免疫性干眼的防治提供新的干预策略和实验依据。方法1.构建IL-10基因修饰的兔ADSCs及鉴定:构建并制备携载IL-10基因的慢病毒载体及空载对照载体并进行慢病毒的包装,分离培养原代兔ADSCs,运用包装好的携带IL-10目的基因的病毒颗粒及对照空载病毒颗粒对ADSCs进行体外感染,Q-PCR及Western blot检测IL-10-ADSCs细胞中IL-10基因mRNA及蛋白过表达水平,RT-PCR验证IL-10-ADSCs的干细胞特性。2.发病早期输注IL-10-ADSCs对兔自身免疫性干眼的治疗作用:建立T细胞诱导的兔自身免疫性干眼模型,将动物随机分组为模型组、ADSCs干预组和IL-10-ADSCs干预组,分别于造模后次日自耳缘静脉输注PBS、ADSCs或IL-10-ADSCs,隔日输注一次,共进行5次输注。分别于造模前及造模后2、4、6、8周观察各组兔子干眼相关临床指标（泪液分泌量、泪膜破裂时间及角膜荧光素钠染色）。8周后处死兔子,取材进行病理学HE染色,观察各组兔子泪腺及结膜组织中淋巴细胞浸润情况。3.IL-10-ADSCs对兔自身免疫性干眼免疫调控机制的研究。Q-PCR检测各组兔子泪腺组织中Th17细胞相关细胞因子IL-17和转录因子RORC的表达水平。分离培养兔泪腺上皮细胞及自体外周血淋巴细胞建立淋巴细胞体外激活共培养体系,分组按PBMCs:ADSCs为5:1的比例加入等量ADSCs、IL-10-ADSCs及GFP-ADSCs,同时以等比例的成人真皮成纤维细胞HDF-α（human dermal fibroblasts-α,HDF-α）作为对照组,Q-PCR检测各组细胞Th17细胞相关基因及其分化相关细胞因子mRNA表达水平。结果1.成功构建携载IL-10基因的慢病毒载体,与包装质粒pMD2.G及pSPAX2共转染人胚肾293T细胞,收集提纯慢病毒颗粒。将包装好的携带IL-10目的基因的慢病毒颗粒及空载病毒颗粒对ADSCs进行体外感染,成功构建IL-10-ADSCs和GFP-ADSCs。流式细胞仪检测绿色荧光蛋白表达率达80%以上,Q-PCR及Western blot检测结果显示,IL-10-ADSCs组IL-10基因mRNA及蛋白表达水平均高于对照组GFP-ADSCs（IL-10-ADSCs组:2.79±0.69;GFP-ADSCs组:1.00±0.37,P<0.05）,差异有统计学意义。2.成功构建兔自身免疫性干眼模型,发病早期静脉输注IL-10-ADSCs可有效延缓兔自身免疫性干眼发病进程,与模型组相比,ADSCs干预组和IL-10-ADSCs干预组均可缓解自身免疫性干眼相关临床体征,降低泪腺及结膜组织中淋巴细胞浸润程度,且IL-10-ADSCs效果进一步加强。3.IL-10-ADSCs对兔自身免疫性干眼免疫调控作用研究结果表明,IL-10-ADSCs静脉输注可显着降低泪腺组织中Th17细胞相关细胞因子IL-17及转录因子RORC的表达水平,较ADSCs干预组降低效果进一步加强。体外探究IL-10-ADSCs对兔外周血Th17细胞分化相关基因表达的调控,结果表明,与对照组HDF-α相比,ADSCs组、IL-10-ADSCs组及GFP-ADSCs组均可降低兔外周血Th17细胞相关基因mRNA表达水平,且IL-10-ADSCs组对IL-17、RORC、IL-1β及TGF-β的降低效果较ADSCs组及GFP-ADSCs组进一步加强。结论慢病毒载体可有效介导ADSCs过表达IL-10基因,且不影响其干细胞特性。疾病早期耳缘静脉输注IL-10-ADSCs可有效延缓兔自身免疫性干眼的发病进程,且与ADSCs相比效果进一步加强。IL-10-ADSCs可有效降低泪腺组织中Th17细胞相关细胞因子IL-17和转录因子RORC的表达水平。在体外,IL-10-ADSCs可抑制淋巴细胞混合培养体系中Th17细胞相关基因及免疫微环境中Th17细胞分化相关基因mRNA表达水平。因此,IL-10-ADSCs可能通过抑制Th17细胞免疫反应延缓兔自身免疫性干眼发病进程。
二、绿色荧光蛋白基因逆转录病毒载体转染人骨髓间充质干细胞及表达的研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、绿色荧光蛋白基因逆转录病毒载体转染人骨髓间充质干细胞及表达的研究（论文提纲范文）
（1）hESC衍生和组织来源间充质干细胞慢病毒转导GFP基因的特性分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 常用缩写词中英文对照表 |
| 前言 |
| 第一部分 pLVX-IRES-Puro-GFP慢病毒载体的构建及转导hESC-MSC、hADSC、hUC-MSC |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 pLVX-IRES-Puro-GFP慢病毒的包装 |
| 2.2 慢病毒转导hESC-MSC、hADSC、hUC-MSC的情况 |
| 3 讨论 |
| 3.1 pLVX-IRES-Puro-GFP慢病毒载体的构建 |
| 3.2 慢病毒转导hESC-MSC、hADSC、hUC-MSC的转导效率 |
| 4 结论 |
| 第二部分 GFP+MSCs细胞系的建立及培养与传代 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 GFP+MSCs的形态观察和GFP表达情况 |
| 2.2 GFP+MSCs的培养和传代 |
| 3 讨论 |
| 3.1 GFP+MSCs细胞系的建立 |
| 3.2 GFP+MSCs的传代和培养 |
| 4 结论 |
| 第三部分 hESC-MSC、hADSC、hUC-MSC标记GFP基因前后特性分析 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 MSCs标记GFP基因前后增殖力比较 |
| 2.2 MSCs标记GFP基因前后体外诱导分化情况 |
| 2.3 MSCs标记GFP基因前后细胞表型鉴定 |
| 3 讨论 |
| 3.1 MSCs标记GFP基因前后增殖力比较 |
| 3.2 MSCs标记GFP基因前后体外诱导分化能力评估 |
| 3.3 MSCs标记GFP基因前后细胞表型的表达情况 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 荧光蛋白法标记在间充质干细胞中的应用进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（2）Wnt7a通过RUNX2调控骨髓间充质干细胞成骨分化及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一章 人MSCs的分离和鉴定 |
| 1. 材料 |
| 2. 方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 第二章 人MSCs体外分化和Wnt7a的表达 |
| 1. 材料 |
| 2. 方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 第三章 慢病毒载体沉默Wnt7a基因对MSCs分化的影响 |
| 1. 材料 |
| 2. 方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 第四章 慢病毒载体过表达Wnt7a基因对MSCs分化的影响 |
| 1. 材料 |
| 2. 方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 第五章 Wnt7a通过RUNX2调节MSCs骨分化 |
| 1. 材料 |
| 2. 方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 博士期间发表论文和参与课题情况 |
| 致谢 |
（3）LIM矿化蛋白1调控人牙髓干细胞复合氧化石墨烯改性支架促进组织再生研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一章 人牙髓干细胞的分离、培养及鉴定 |
| 1 材料 |
| 1.1 主要材料和试剂 |
| 1.2 实验仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 hDPSCs的分离、纯化和培养 |
| 2.2 hDPSCs的鉴定 |
| 3 结果 |
| 3.1 hDPSCs的分离、纯化和培养 |
| 3.2 hDPSCs的鉴定 |
| 4 讨论 |
| 5 本章小结 |
| 第二章 LMP-1对hDPSCs增殖与定向分化能力的影响 |
| 1 材料 |
| 1.1 主要材料和试剂 |
| 1.2 实验仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 慢病毒预感染hDPSCs |
| 2.2 慢病毒转染hDPSCs后LMP-1表达情况检测 |
| 2.3 慢病毒转染hDPSCs后细胞增殖能力检测 |
| 2.4 慢病毒转染hDPSCs后ALP活性检测 |
| 2.5 慢病毒转染hDPSCs后茜素红染色及半定量检测 |
| 2.6 慢病毒转染hDPSCs后矿化相关基因表达情况 |
| 2.7 慢病毒转染hDPSCs后矿化相关蛋白表达情况 |
| 2.8 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 慢病毒预感染hDPSCs |
| 3.2 慢病毒转染hDPSCs后LMP-1的表达 |
| 3.3 慢病毒转染对hDPSCs增殖能力的影响 |
| 3.4 慢病毒转染hDPSCs后ALP活性检测 |
| 3.5 慢病毒转染hDPSCs后茜素红染色 |
| 3.6 慢病毒转染hDPSCs后矿化相关基因的表达 |
| 3.7 慢病毒转染hDPSCs后矿化相关蛋白的表达 |
| 4 讨论 |
| 5 本章小结 |
| 第三章 LMP-1调控hDPSCs定向分化的MAPK通路机制 |
| 1 材料 |
| 1.1 主要材料和试剂 |
| 1.2 实验仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 MAPK通路抑制剂作用下细胞的ALP活性检测 |
| 2.2 MAPK通路抑制剂作用下细胞的MAPK通路和矿化相关蛋白表达情况 |
| 3 结果 |
| 3.1 MAPK通路抑制剂作用下细胞的ALP活性 |
| 3.2 MAPK通路抑制剂作用下细胞的MAPK通路和矿化相关蛋白表达情况 |
| 4 讨论 |
| 5 本章小结 |
| 第四章 GO/GS复合支架材料的制备研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 主要材料和试剂 |
| 1.2 实验仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 改良Hummers法合成GO |
| 2.2 GO的结构表征检测 |
| 2.3 GO涂覆的明胶海绵复合支架的制作 |
| 2.4 GO涂覆的明胶海绵复合支架的理化性能检测 |
| 2.5 GO涂覆的明胶海绵复合支架对细胞生物学特性的影响 |
| 2.6 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 GO的合成及结构表征 |
| 3.2 支架的表征和理化性能 |
| 3.3 支架对细胞生物学特性的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 本章小结 |
| 第五章 LMP-1转染hDPSCs复合GO/GS支架的体内研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 主要材料和试剂 |
| 1.2 实验仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 LMP-1转染hDPSCs |
| 2.2 细胞接种 |
| 2.3 细胞与支架复合物体内培养 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 本章小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 附录一 综述 LMP-1在干细胞中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录二 中英文缩略词对照表 |
| 成果 |
| 致谢 |
（4）氧化铁纳米粒改良的间充质干细胞载体构建及用于脑胶质瘤的靶向治疗研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 全文缩略词 |
| 前言 |
| 第一章 氧化铁纳米粒用于MSCs高效携载和表达自杀基因 |
| 1.1 仪器与试剂 |
| 1.1.1 仪器 |
| 1.1.2 试剂 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 MFIONs用于MSCs的基因转染 |
| 1.2.2 体外自杀效应 |
| 1.2.3 体外旁观者效应 |
| 1.3 实验结果与讨论 |
| 1.3.1 基于 MFIONs 的转染体系用于 MSCs 的基因转染 |
| 1.3.2 体外自杀效应 |
| 1.3.3 体外旁观者效应考察 |
| 1.4 本章小结 |
| 第二章 氧化铁纳米粒诱导Cx43 过表达改善GJIC功能并促进旁观者效应 |
| 2.1 仪器与试剂 |
| 2.1.1 仪器 |
| 2.1.2 试剂 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 MFIONs对 MSCs及 C6 脑胶质瘤细胞上Cx43 表达的影响 |
| 2.2.2 MFIONs对 MSCs与 C6 脑胶质瘤细胞间GJIC的影响 |
| 2.2.3 MFIONs诱导的Cx43 过表达对GJIC功能的影响 |
| 2.2.4 MFIONs诱导的Cx43 过表达对旁观者效应的影响 |
| 2.3 实验结果与讨论 |
| 2.3.1 MFIONs促进Cx43 过表达 |
| 2.3.2 MFIONs诱导的Cx43 过表达促进GJIC功能 |
| 2.3.3 MFIONs诱导的Cx43 过表达促进旁观者效应 |
| 2.3.4 GJIC功能影响旁观者效应的有效发挥 |
| 2.4 本章小结 |
| 第三章 基于MFIONs改良MSCs的肿瘤靶向递送载体的构建 |
| 3.1 仪器与试剂 |
| 3.1.1 仪器 |
| 3.1.2 试剂 |
| 3.1.3 实验动物 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 体外肿瘤细胞趋向实验 |
| 3.2.2 静脉注射的经MFIONs改良的MSCs的体内分布 |
| 3.2.3 腹腔注射的GCV的颅内分布 |
| 3.3 实验结果与讨论 |
| 3.3.1 MFIONs提高MSCs在体外对C6 脑胶质瘤细胞的趋向性 |
| 3.3.2 MFIONs促进MSCs在体内向脑胶质瘤靶向归巢 |
| 3.3.3 腹腔注射的GCV的颅内分布 |
| 3.4 本章小结 |
| 第四章 体内治疗实验及初步的安全性评价 |
| 4.1 仪器与试剂 |
| 4.1.1 仪器 |
| 4.1.2 试剂 |
| 4.1.3 实验动物 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 体内抗肿瘤疗效研究 |
| 4.2.2 短期安全性评价试验 |
| 4.3 实验结果与讨论 |
| 4.3.1 体内抗肿瘤疗效研究 |
| 4.3.2 短期安全性评价试验 |
| 4.4 本章小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 综述 间充质干细胞的肿瘤归巢特性及其肿瘤靶向治疗应用研究进展 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
（5）构建miR-378a修饰的BMMSCs膜片的成骨和成血管性能的体外实验研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词对照表 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 研究内容与方法 |
| 1 实验动物与材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要实验试剂 |
| 1.3 主要实验仪器 |
| 2 实验方法及步骤 |
| 2.1 BMMSCs分离、培养与鉴定 |
| 2.2 miR-378a过表达慢病毒转染BMMSCs |
| 2.3 慢病毒转染BMMSCs后效率检测 |
| 2.4 CCK-8 检测转染后细胞毒性 |
| 2.5 构建miR-378a修饰的BMMSCs膜片及成骨诱导 |
| 2.6 ALP染色评估BMMSCs膜片成骨能力 |
| 2.7 成骨及成血管相关因子m RNA及蛋白水平检测 |
| 3 质量控制 |
| 4 统计方法 |
| 5 技术路线图 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 参考文献 |
| 综述 微小RNA在血管形成及骨改建中的作用 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 |
| 导师评阅表 |
（6）FGF-2慢病毒载体介导的人羊膜间充质干细胞复合兔自体富血小板血浆促进腱—骨愈合的实验研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 人羊膜间充质干细胞的分离培养及鉴定 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第二部分 不同浓度的FGF-2溶液诱导人羊膜间充质干细胞及FGF-2慢病毒载体转染人羊膜间充质干细胞 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第三部分 富血小板血浆的制备及激活 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第四部分 FGF-2慢病毒载体介导的人羊膜间充质干细胞复合兔自体富血小板血浆促进腱-骨愈合 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（7）氧化应激状态下骨髓间充质干细胞过表达Nrf2基因与心肌微血管内皮细胞共培养的实验研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 Nrf2/HO-1/NQO1 轴在过表达Nrf2基因的骨髓间充质干细胞(BMSCs)凋亡中的作用以及机制 |
| 1.材料与方法 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 4.结论 |
| 第二部分 Nrf2/HO-1/NQO1 轴在抑制BMSCs凋亡及共培养后促进CMECs血管新生中的作用及机制研究 |
| 1.材料与方法 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 4.结论 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（8）静脉注射hBMP-2基因转染ADSCs干预兔骨质疏松性骨折的实验研究（论文提纲范文）
| 中英缩略词对照表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述:骨髓间充质干细胞治疗骨质疏松性骨折的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（9）Pdx1、Ngn3、Mnx1、Mafa和Pax4组合转染诱导犬ADSCs向IPCs分化的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 糖尿病概况 |
| 1.2 干细胞与糖尿病治疗 |
| 1.2.1 胚胎干细胞 |
| 1.2.2 诱导多能干细胞 |
| 1.2.3 间充质干细胞 |
| 1.3 胰岛β细胞发育调控基因的研究进展 |
| 1.3.1 Pdx1 |
| 1.3.2 Foxa2 |
| 1.3.3 Insm1 |
| 1.3.4 Ngn3 |
| 1.3.5 Mafa |
| 1.3.6 Mnx1 |
| 1.3.7 Pax4 |
| 1.4 干细胞体外定向分化为胰岛β细胞的研究进展 |
| 1.4.1 诱导剂法 |
| 1.4.2 联合培养法 |
| 1.4.3 转基因法 |
| 1.5 小结 |
| 第二章 基因Foxa2、Insm1、Mnx1 的功能验证及筛选 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 菌株、质粒和细胞 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 基因Foxa2、Insm1、Mnx1 的合成与体外扩增 |
| 2.2.2 目的序列PCR扩增 |
| 2.2.3 目的序列的鉴定与回收 |
| 2.2.4 重组腺病毒穿梭载体的构建 |
| 2.2.5 重组腺病毒穿梭载体双酶切鉴定及二次转化扩增 |
| 2.2.6 重组腺病毒载体的构建和PacⅠ酶切鉴定 |
| 2.2.7 重组腺病毒的包装、扩增、滴度测定 |
| 2.2.8 感染犬脂肪间充质干细胞 |
| 2.2.9 荧光定量PCR检测胰岛β细胞发育调控基因表达 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 含目的基因的真核过表达载体的构建及鉴定 |
| 2.3.2 含目的基因的腺病毒过表达载体的构建及鉴定 |
| 2.3.3 荧光定量PCR检测胰岛β细胞发育调控基因表达水平 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 多基因共表达重组腺病毒载体的构建 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 菌株、质粒和细胞 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.1.3 主要仪器 |
| 3.2 试验方法 |
| 3.2.1 目的基因的合成和体外扩增 |
| 3.2.2 目的序列的PCR扩增与鉴定 |
| 3.2.3 重组腺病毒穿梭载体的构建 |
| 3.2.4 重组腺病毒穿梭载体的PCR、双酶切鉴定及二次转化扩增 |
| 3.2.5 重组腺病毒载体的构建 |
| 3.2.6 重组腺病毒载体的鉴定和二次转化扩增 |
| 3.2.7 重组腺病毒载体的包装、扩增、滴度测定 |
| 3.2.8 目的基因表达水平的检测 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 目的基因扩增及重组腺病毒穿梭载体PCR鉴定 |
| 3.3.2 重组腺病毒穿梭载体的双酶切鉴定 |
| 3.3.3 重组腺病毒载体的PacⅠ酶切鉴定 |
| 3.3.4 多基因共表达腺病毒的包装与扩增 |
| 3.3.5 病毒滴度 |
| 3.3.6 目的基因表达水平 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 多基因重组腺病毒载体感染犬ADSCs诱导其向IPCs分化 |
| 4.1 材料 |
| 4.1.1 细胞 |
| 4.1.2 主要试剂 |
| 4.1.3 主要仪器 |
| 4.2 试验方法 |
| 4.2.1 重组腺病毒感染犬ADSCs |
| 4.2.2 诱导阶段细胞形态学观察及双硫腙染色 |
| 4.2.3 荧光定量PCR检测胰岛β细胞发育调控基因表达 |
| 4.2.4 葡萄糖刺激胰岛素分泌试验 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 诱导阶段细胞形态学观察及双硫腙染色 |
| 4.3.2 胰岛β细胞发育调控基因表达水平 |
| 4.3.3 葡萄糖刺激胰岛素分泌水平 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 结论 |
| 附录 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（10）IL-10基因修饰脂肪间充质干细胞对兔自身免疫性干眼免疫调控作用的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、IL-10基因修饰的兔脂肪来源间充质干细胞的构建 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 实验主要仪器设备 |
| 1.1.3 实验主要试剂 |
| 1.1.4 实验方法 |
| 1.1.5 统计学方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 携带IL-10基因重组慢病毒质粒的构建 |
| 1.2.2 携带IL-10基因重组慢病毒质粒的鉴定 |
| 1.2.3 过表达IL-10基因慢病毒的包装与滴度测定 |
| 1.2.4 慢病毒感染ADSCs |
| 1.2.5 IL-10-ADSCs细胞中IL-10 基因mRNA及蛋白过表达水平检测 |
| 1.3 讨论 |
| 1.3.1 ADSCs的免疫调节特性 |
| 1.3.2 IL-10与自身免疫性疾病 |
| 1.4 小结 |
| 二、IL-10-ADSCs对兔自身免疫性干眼的免疫调控作用 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 实验主要试剂 |
| 2.1.3 实验方法及步骤 |
| 2.1.4 统计学方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 IL-10-ADSCs对兔自身免疫性干眼相关临床指标的影响 |
| 2.2.2 IL-10-ADSCs对泪腺及结膜组织淋巴细胞浸润程度的影响 |
| 2.2.3 IL-10-ADSCs对泪腺组织中Th17 细胞相关基因表达的影响 |
| 2.2.4 IL-10-ADSCs体外对Th17细胞相关基因表达的影响 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 Th17细胞在SS发病机制中的作用 |
| 2.3.2 IL-10 基因修饰MSCs对自身免疫性干眼的免疫调控作用 |
| 2.3.3 本研究不足之处及下一步实验计划 |
| 2.4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 慢病毒载体在眼科基因治疗中的应用 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
四、绿色荧光蛋白基因逆转录病毒载体转染人骨髓间充质干细胞及表达的研究（论文参考文献）
- [1]hESC衍生和组织来源间充质干细胞慢病毒转导GFP基因的特性分析[D]. 刘云. 山西医科大学, 2021(01)
- [2]Wnt7a通过RUNX2调控骨髓间充质干细胞成骨分化及机制研究[D]. 杨磊落. 南方医科大学, 2021(02)
- [3]LIM矿化蛋白1调控人牙髓干细胞复合氧化石墨烯改性支架促进组织再生研究[D]. 穆睿. 南方医科大学, 2021(02)
- [4]氧化铁纳米粒改良的间充质干细胞载体构建及用于脑胶质瘤的靶向治疗研究[D]. 李艾. 浙江大学, 2021(02)
- [5]构建miR-378a修饰的BMMSCs膜片的成骨和成血管性能的体外实验研究[D]. 李君. 新疆医科大学, 2021(09)
- [6]FGF-2慢病毒载体介导的人羊膜间充质干细胞复合兔自体富血小板血浆促进腱—骨愈合的实验研究[D]. 张骏. 遵义医科大学, 2020(12)
- [7]氧化应激状态下骨髓间充质干细胞过表达Nrf2基因与心肌微血管内皮细胞共培养的实验研究[D]. 汤娅. 遵义医科大学, 2020(12)
- [8]静脉注射hBMP-2基因转染ADSCs干预兔骨质疏松性骨折的实验研究[D]. 杨显红. 遵义医科大学, 2020(12)
- [9]Pdx1、Ngn3、Mnx1、Mafa和Pax4组合转染诱导犬ADSCs向IPCs分化的研究[D]. 阮晨梅. 西北农林科技大学, 2020
- [10]IL-10基因修饰脂肪间充质干细胞对兔自身免疫性干眼免疫调控作用的实验研究[D]. 赵璐. 天津医科大学, 2020(06)