一、EDTA微波脱钙骨的免疫组化染色（论文文献综述）
梁求真[1]（2021）在《基于利福喷丁构建局部植骨递药系统及外周骨靶向递药系统的研究》文中指出目的:基于利福喷丁（RPT）、乳化技术及聚乳酸-羟基乙酸（PLGA）类高分子聚合物,构建可供局部植骨/术中应用的利福喷丁递药系统（RPT/Bone-graft DDS）和可供外周给药靶向到骨/术前或术后应用的利福喷丁递药系统（RPT/Bone-target DDS）,并通过体内外实验对所制备的递药系统进行评价。方法:（1）采用SPG膜乳化技术制备聚乳酸微球包载利福喷丁,并观察微球的表观特征、测量微球的粒径,再与羟基磷灰石/磷酸三钙支架复合构建RPT/Bone-graft DDS,并观察该系统的表观特征。（2）采用酰胺反应合成靶向分子修饰的聚乙二醇化PLGA共聚物,并利用紫外及红外光谱的检测方法确定共聚物的成分;再采用超声乳化技术包载利福喷丁制备RPT/Bone-target DDS,并测量其粒径、表面电位、多分散系数,观察其表观特征。（3）确定利福喷丁的紫外检测条件,分别评估PLGA利福喷丁微球及骨靶向纳米粒的包封率、载药量、体外释放及体外抑菌情况,另测量外周骨靶向递药系统的体外骨靶向能力;再分离、培养大鼠骨髓间充质干细胞（r BMSCs）并对其进行鉴定,检测利福喷丁微球、纳米粒及支架的细胞毒性,另外用大鼠红细胞悬液检测利福喷丁纳米粒的溶血毒性;将所得细胞分别与载药微球或RPT/Bone-graft DDS共培养,并观察其表观特征,计算细胞粘附率。（4）建立大鼠股骨外侧髁骨缺损模型,植入RPT/Bone-graft DDS,分别于术后不同时间点取材,观察大体形态,同时进行X线和CT的影像学检查,制作标本分别进行HE、番红-固绿、免疫组化及免疫荧光染色观察;（5）建立利福喷丁大鼠血浆生物制品的高效液相色谱法的检测条件,并检测RPT/Bone-graft DDS在大鼠股骨髁内的释放情况;（6）采用小动物活体成像仪检测RPT/Bone-target DDS小鼠给药后的骨靶向性能;（7）于术后不同时间点取血检测肝肾功能,测定血浆、脏器和骨组织的药物浓度,评估骨靶向能力;并对各脏器行HE染色观察形态。结果:（1）利福喷丁微球外观为砖红色,呈表面光滑的圆球形,平均粒径约为36.63μm,RPT/Bone-graft DDS电镜观察可见多孔的、相互连通的孔径,其内部孔隙可见分散的微球;（2）紫外及红外光谱分析提示已成功合成靶向分子修饰的聚乙二醇化PLGA共聚物。RPT/Bone-target DDS表面带负电,平均粒径为48.83nm,透射电镜观察纳米粒呈黑色的、规则的小圆球形,且分散均匀。（3）利福喷丁在紫外检测条件下于477 nm及336 nm处有最大吸收峰,两处波长均可计算标准曲线方程用于浓度检测,且336 nm处具有更低的检测下限;测得利福喷丁微球的包封率为70.28%,载药量为36.12%,体外释放初始阶段呈爆发释放,第40天累积释放78.3%;体外抑菌实验表明于局部植骨系统中释放出的利福喷丁其抑菌能力与利福喷丁原药一致。（4）r BMSCs经鉴定符合间充质干细胞特性,利福喷丁微球及其局部植骨递药系统在一定浓度范围内对细胞无毒性,并可与细胞共培养,细胞呈现粘附生长,RPT/Bone-graft DDS的电镜扫描结果提示生物相容性良好。（5）RPT/Bone-target DDS的载药量为8.1%,包封率为76.3%,体外释放于6小时内呈现爆发释放,随后64小时缓慢释放;在一定浓度范围内利福喷丁纳米粒对r BMSCs无毒性,未见明显溶血;抑菌实验表明骨靶向递药系统的最低抑菌药物浓度为0.094μg/m L,低于游离药物（P<0.05）;体外骨靶向实验结果提示该递药系统的骨亲和能力为60.80%,高于非骨靶向递药系统（P<0.05）。（6）大鼠股骨骨缺损模型建立后植入各组支架,大体观察及影像学检查结果提示载药支架组及非载药支架组相对于空白对照组可促进骨修复,在术后6周时与空白对照组相比差距明显,新生骨体积百分比均高与对照组（P<0.05）;组织病理学检查结果提示,支架组骨修复能力强于空白对照组,OCN、BMP-2、TGFβ1成骨指标的表达量高于对照组（P<0.05）,且RPT/Bone-graft DDS可在大鼠植骨局部缓慢释放利福喷丁。（7）RPT/Bone-target DDS小鼠给药后经活体成像仪扫描可见骨组织浓聚,大鼠给药后可改变药物分布,骨靶向组的骨组织浓度显着高于非骨靶向组,且肝脏药物浓度降低,血液生化指标及各脏器病理检查未见明显的脏器毒性。结论:RPT/Bone-graft DDS及RPT/Bone-target DDS可以缓慢释放利福喷丁,具有良好的缓释性能和生物相容性,其中RPT/Bone-graft DDS可用于填补术中骨缺损,在提高植骨区域药物浓度的同时还能加速骨修复,而RPT/Bone-target DDS可用于术前或术后的药物治疗,外周给药后靶向到骨组织,增加骨组织中的药物浓度,改变药物分布,有助于降低给药剂量和频率。
杨海丽[2]（2020）在《DDR2是骨膜成骨细胞和成骨祖细胞潜在的细胞表面标记物》文中进行了进一步梳理目的:骨膜双层结构包含成骨细胞和成骨祖细胞组成的内层和由骨膜成纤维细胞组成的外层。本研究旨在探讨心肌成纤维细胞常见特异表面标记物DDR2（discoidin domain tyrosine kinase receptor 2）与骨膜成骨细胞和成骨祖细胞的关系。骨膜双层结构细胞表面标志物的鉴定对组织再生具有重要意义。方法:（1）利用免疫组化和免疫荧光,在C57BL/6J小鼠的肋骨和股骨骨膜中分别检测DDR2,成纤维细胞特异性蛋白‐1（fibroblast specific protein-1,FSP-1）和碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）在骨膜中的表达。（2）通过流式细胞仪分别分选出骨膜中DDR2阳性和FSP-1阳性的细胞,并比较两者的成骨分化能力。结果:（1）DDR2主要标记了骨膜内层的成骨细胞,并且皮尔森（Pearson）相关系数表明其与ALP的表达显着相关。从骨膜中分离出DDR2阳性的成骨细胞可明显诱导骨钙化。（2）相反,FSP-1主要标记骨膜外层的成纤维细胞,而皮尔森相关系数表明FSP-1与ALP的表达相关性较差。FSP-1阳性的骨膜外层成纤维细胞不能被诱导骨的钙化,说明其缺乏成骨再生能力。结论:DDR2可能是一种新的潜在的细胞表面标记物,可用于骨膜内层成骨细胞和成骨祖细胞的鉴定和分离,对于骨组织的再生治疗具有重大的意义。
陈红庆[3]（2019）在《多元个性化3D打印自体颅骨的实现及其修复兔颅骨极限缺损的骨再生研究》文中研究指明3D打印技术已逐渐被应用于钛合金,聚甲基丙烯酸甲酯和聚醚醚酮等颅骨修复植入物的制造,以便能更加方便、高效、准确的加工此类具有特定形状需求的植入物。然而随着颅骨成形术的目标开始从外形重建向骨再生进展,现阶段的3D打印形式仍主要集中在颅骨植入物的形状与骨缺损的匹配上,缺乏实现骨再生的理想材料和活细胞。这显然不能满足颅骨缺损修复的骨再生需求。迄今为止,已被证实具有促进骨再生作用的生物材料中,其中多数仍然存在成本高、异源性、骨再生能力有限等缺点。而且长期的异源性材料植入和异源性细胞的使用不可避免会引起异物反应或免疫排斥。自体颅骨瓣因其在生物来源上具有真正的患者特异性而常被作为颅骨修复材料的首选,却因创伤性颅脑损伤、缺损面积过大、骨瓣碎裂、颅骨修复时间晚等不利因素而出现无菌性骨坏死并最终演变为骨瓣吸收。此外,处于颅骨关键生长期的儿童因活跃的骨质重构而更易出现骨瓣吸收。本研究从个性化颅骨修复再生的角度出发,提出包括外形特异、材料来源特异（自体骨基质）和细胞来源特异（自体细胞）的多元个性化3D打印植入物解决方案,拟以自体颅骨瓣为原料制造具有材料特异性的3D打印自体颅骨植入物,通过结合自体骨髓间充质干细胞（BMSCs）进一步构建多元个性化颅骨修复植入物。并在不使用外源性成骨活性因子的情况下,对此植入物的体内和体外成骨能力进行评估,以期提供一种真正兼具患者特异性和骨再生能力的颅骨缺损修复解决方案。第一部分3D打印自体骨个性化外形与结构的实现及特性研究【目的】探索建立以自体骨瓣为原料的3D打印体系的可行性;测试该3D打印体系在特异外形和结构方面的稳定性、实用性和多样性;评价该体系下3D打印自体骨的理化特性。【方法】低温研磨冻干的兔自体骨瓣获得骨粉并在电镜下进行微观形貌观察,使用激光粒度分析仪测量粒度分布;将自体骨粉与多种溶剂制备的聚（ε-己内酯）（PCL）墨水混合获得骨浆料,评价不同溶剂下自体骨浆料的可打印性;在优化的3D打印参数下,以不同填充率及层间角度进行简易模型及基于人体影像数据的成人尺寸模型打印;电镜下观察3D打印自体骨的微观形貌,以万能测试机进行力学强度测试;以样品浸提液孵育L929小鼠成纤维细胞系,评价样本细胞毒性。【结果】兔自体骨瓣的骨粉得率约47%,骨粉粒径达微米级;以冰乙酸为溶剂的自体骨浆料打印流畅且易于成型,浆料可顺利通过的打印喷头最小规格为22G;打印模型可只经过水处理达到固化作用。通过基于冰乙酸的自体骨浆料可以实现多种结构、多种规格的样品打印;电镜下的微观结构呈海绵样,其杨氏模量为3.50±0.73MPa,水处理72h后细胞毒性达到0级。【结论】（1）以自体骨瓣为原料建立3D打印体系是可行的;（2）基于冰乙酸PCL打印墨水的自体骨浆料体系具有良好的打印稳定性、实用性和多样性;（3）3D打印自体骨具有一定的力学强度和良好的生物安全性。第二部分自体BMSCs的分离、培养及多细胞分化潜能鉴定【目的】使用骨髓血进行自体BMSCs的分离和体外培养,并通过诱导其向多种细胞分化证实其多向分化潜能。【方法】取兔股骨上端骨髓血,密度梯度离心获得单核细胞后贴壁筛选培养,并通过Alamar Blue实验检测P3自体BMSCs的增殖能力;诱导对数生长期的P3 BMSCs分别向成骨细胞、脂肪细胞及软骨细胞定向分化,以检测细胞的多向分化潜能。标记细胞以确保其与对应的自体骨瓣来自同一个体。【结果】自体BMSCs呈梭形,束状排列,当细胞传代培养至P3时细胞形态更加均一;P3自体BMSCs在第3天进入对数生长期,到达第13天时进入平台期。成骨诱导后碱性磷酸酶（ALP）四唑氮蓝/5-溴-4-氯-3-吲哚基-磷酸盐（NBT/BCIP）染色及细胞外钙盐茜素红S染色、成脂诱导后细胞内脂滴油红O染色及成软骨诱导后细胞外硫酸糖胺聚糖阿利辛蓝（pH1.0）染色均呈阳性。【结论】（1）密度梯度离心联合贴壁筛选获得的自体BMSCs具有良好的生长活性和多向分化潜能;（2）自体BMSCs有望用于3D打印自体骨以构建多元个性化颅骨修复植入物。第三部分3D打印自体骨对自体BMSCs的细胞亲和性研究【目的】明确自体BMSCs在3D打印自体骨上的初始粘附率,增殖情况以及细胞活力。【方法】将对数生长期P3自体BMSCs种植于3D打印自体骨24h后行CCK-8实验,以2D培养同样数量的BMSCs为参照,计算BMSCs的相对有效粘附率;隔天行Alamar Blue实验,检测自体BMSCs在3D打印自体骨中的增殖情况;分别于不同时间点行细胞活/死染色,计算自体BMSCs的细胞存活率;电镜下观察3D打印自体骨中自体BMSCs的细胞形态。分别以纳米羟基磷灰石（nHA）和异体骨粉为原料的3D打印nHA骨及3D打印异体骨设为对照组。【结果】3D打印自体骨对自体BMSCs的细胞粘附率最高;细胞数量在三种3D打印骨中于第15天达到峰值并保持4天;整个培养过程中,3D打印自体骨和3D打印nHA骨中BMSCs的细胞活力明显强于3D打印异体骨;培养第14天时,扫描电子显微镜（SEM）下发现3D打印自体骨中的细胞在形态上与成骨细胞类似,3D打印nHA骨中的细胞仍保持BMSCs的细胞形态,3D打印异体骨中的细胞则出现老化迹象。【结论】（1）3D打印自体骨对自体BMSCs具有良好的细胞亲和性;（2）自体BMSCs在3D打印自体骨中有自发向成骨细胞分化的可能;（3）自体BMSCs与3D打印自体骨结合有望构建出具有骨再生能力的多元个性化自体骨植入物。第四部分3D打印自体骨中自体BMSCs的体外成骨能力研究【目的】明确3D打印自体骨中自体BMSCs自发向成骨细胞分化的能力,为具有骨再生能力的多元个性化3D打印自体骨构建提供分子生物学支持。【方法】于不同时间点对3D打印自体骨中的BMSCs进行ALP活性检测;分别于培养7d、14d及21d应用实时定量聚合酶链式反应进行runt相关转录因子2（RUNX2）、ALP、I型胶原α1片段（COL1A1）、骨桥蛋白（OPN）和骨钙蛋白（OCN）等成骨分化相关基因表达检测;3D打印nHA骨及3D打印异体骨设为对照组。【结果】在没有外源性成骨因子的情况下,3D打印自体骨中细胞的ALP活性更早、更显着的升高;RUNX2、ALP、COL1A1、OPN和OCN等成骨分化相关基因表达的变化趋势均提示3D打印自体骨中的自体BMSCs更易自发向成骨细胞分化。【结论】（1）3D打印自体骨中的自体BMSCs能更好地自发向成骨细胞分化;（2）3D打印自体骨和自体BMSCs为构建多元个性化自体骨提供了良好的分子生物学基础。第五部分多元个性化3D打印自体骨修复兔颅骨极限缺损的骨再生研究【目的】结合3D打印自体骨及自体BMSCs,构建多元个性化3D打印自体骨;通过兔颅骨极限缺损模型验证这种多元个性化植入物在体内的骨再生能力。【方法】建立兔颅骨极限缺损模型;按上述方法制备3D打印自体骨并提取自体BMSCs;将自体BMSCs种植于3D打印自体骨构建多元个性化骨植入物;建模1月后将多元个性化自体骨回植,3个月后收获标本;通过微型计算机断层扫描（MicroCT）分析新骨矿化,通过HE染色、Masson三色染色、I型胶原和OCN免疫组化分析进一步评估新骨生成情况,通过血管性血友病因子（vWF）免疫荧光分析评估新骨血管生成情况;同样方法应用于无细胞的3D打印自体骨、携带细胞及无细胞的3D打印nHA骨以对比评估其体内成骨能力。【结果】Micro-CT分析结果提示多元个性化自体骨能更有效的促进矿物形成和沉积进而形成矿化新骨;HE染色显示植入物内部的新生骨围绕打印纤维丝生成,并在新骨边缘可观察到明显的活跃成骨细胞;新骨大部分被Masson三色染色染成红色,提示新骨为成熟骨;新生骨的I型胶原免疫组化染色呈阳性;OCN免疫组化染色在新生骨内部及边缘均呈阳性,提示新骨仍处于成骨的活跃状态;vWF免疫荧光染色显示部分成熟骨生成了内生性血管;无细胞3D打印自体骨的打印纤维丝周围也有新骨生成,但骨成熟度和成骨活性均弱于多元个性化自体骨;在3DP打印nHA骨中只观察到一点初始形成的类骨组织,并且当结合BMSCs时只形成了极少量的新骨。【结论】（1）多元个性化自体骨具有良好的天然骨再生能力,具备了患者特异性骨再生植入物的基本特性;（2）这种多元个性化颅骨植入物的制造为实现真正患者特异性的颅骨缺损修复再生提供了可行性;（3）无细胞3D打印自体骨的骨再生能力较弱,可作为多元个性化自体骨的次选方案。
李建美[4]（2019）在《纳米氧化铈促进基于软骨内成骨的大段骨缺损修复的研究》文中研究指明研究背景:骨缺损是指骨的结构完整性被破坏,主要由于创伤、感染、肿瘤、骨髓炎手术清创、骨肿瘤切除导致,是临床常见的疾病之一。1986年SchmitzJP等提出临界骨缺损的概念,将骨缺损长度达到长骨直径的1.5倍作为骨缺损的临界值,当骨缺损达到或者超过临界值时骨缺损便无法自然愈合。据此诸多学者将大于长骨直径1.5倍的骨缺损称为大段骨缺损。大段骨缺损会引起运动功能丧失并严重影响患者生活质量,其修复一直是临床上的难题。传统临床治疗大段骨缺损主要依赖于骨移植,但因移植骨来源有限、供体-受体免疫排斥反应等缺点极大的限制了该方法在临床上的广泛应用。目前骨组织工程学的飞速发展,为治疗大段骨缺损带来了新的方法,也成为研究的热点。骨组织工程技术不仅可以修复大段骨缺损,且可以按照损伤区形状大量制备,克服了自体、异体骨移植所导致的供区损伤,移植区免疫排斥和致病性等缺点,是公认用于大段骨缺损修复的理想方法。骨组织工程构建组织工程骨进行体内骨缺损修复主要方式有两种:膜内成骨和软骨内成骨。最近的研究证实,与膜内成骨相比,软骨内成骨因其有较为丰富的血供,能更好的进行大段骨缺损的修复。软骨内成骨发育过程中,肥大软骨细胞产生富含X型胶原的无血管软骨基质、分泌基质金属蛋白酶13（MMP13）和血管内皮生长因子（VEGF）,从而介导矿化基质的形成和血管入侵。伴随血管侵入的成骨细胞、破骨细胞和造血前体细胞介导软骨模板的再吸收和血管化骨的形成。因此肥大软骨细胞的调节是软骨内成骨的关键环节,软骨细胞肥大化不足会阻碍软骨内成骨过程中的血管入侵和基质矿化,延迟骨的形成。保证间充质干细胞的充足肥大化是研究软骨内成骨为基础的骨再生的重点,深入发掘其具体分子机制,将可以为临床治疗大段骨缺损提供新的理论基础和治疗方案。最近几十年来,纳米材料因其独特的仿生特征和生物学特性,已成为组织再生领域的研究热点。越来越多的研究表明,部分纳米材料可以通过调节干细胞增殖和分化在骨组织工程中发挥关键作用。在这些纳米材料中,氧化铈纳米颗粒（Ceria nanoparticles,CNPs）因其晶格表面共存三价与四价铈离子(Ce3+/Ce4+),低还原电位使二者可以相互转换,从而赋予了CNPs独特的再生潜能及自由基清除能力,已受到人们极大关注,被广泛应用于纳米生物学和再生医学。目前已有文献报道,CNPs在骨组织中富集,通过其抗氧化特性增强间充质干细胞（Mesenchymal stem cells,MSCs）的粘附与增殖,并进一步刺激MSCs的旁分泌促进内皮祖细胞在骨形成过程中的血管化。但CNPs对MSCs多向分化潜能的影响及其在骨修复中的作用尚不清楚,揭示CNPs调节MSCs多向分化的具体机制,将可以为基于CNPs为生物材料的骨组织工程提供理论基础,对临床治疗大段骨缺损具有重要意义。研究目的:本课题以研究CNPs对骨髓间充质干细胞（Bone mesenchymal stem cells,BMSCs）多向分化潜能的影响为基础,探索基于CNPs为生物界面材料的骨组织工程在大段骨缺损修复中的作用及机制。材料与方法:1.通过微乳液法合成CNPs,并以碳酸盐化合物阿仑膦酸（Alendronate,AL）作为锚定分子,通过多齿配位的方式稳定的结合在CNPs表面,其氨基末端可以有效结合羧基化的PEG链,从而对CNPs表面进行PEG修饰。2.体外探究PEG修饰后的CNPs分别对BMSCs成骨、成软骨、成脂分化的具体影响。（1）通过透射电子显微镜（Transmission Electron Microscope,TEM）观察CNPs在BMSCs中的定位;（2）CCK-8检测CNPs对细胞增殖的影响;（3）通过采用甲苯胺蓝、番红O（Safranin O）、免疫组化染色等不同方法检测CNPs对BMSCs成软骨分化及肥大分化进程的影响,并于诱导后7天、14天分别收取细胞团样品,采用qRT-PCR及Western blot方法检测成软骨相关基因Sox9、COMP、Col2a1的表达情况,于诱导后21天、28天分别收取细胞团样品,通过qRT-PCR及Western blot方法检测软骨肥大化相关基因Runx2、MMP13、Col10a1的表达情况;（4）采用碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase,ALP）和茜素红染色分别检测成骨分化中碱性磷酸酶及钙结节的表达情况,并于成骨诱导后7天、14天、21天分别收取细胞样品,通过qRT-PCR及Western blot检测成骨相关基因Runx2、Osterix2、Col1a1、ALP的表达情况;（5）采用油红（Oil red O）染色检测CNPs对BMSCs成脂分化中脂滴的形成情况,分别于诱导后10天、21天收取细胞样品,通过qRT-PCR及Western blot检测成脂相关基因PPARγ、C/EBPα、C/EBPβ的表达情况。3.通过动物模型,研究PEG修饰后的CNPs作为组织工程骨的界面修饰材料对大段骨缺损修复的效果。（1）将CNPs作为界面修饰材料复合在脱细胞骨基质（Acellular bone matrix,ACBM）上构建组织工程骨支架,将细胞种植在支架上,通过扫描电子显微镜（Scanning electron microscope,SEM）观察细胞的生长状态,激光共聚焦显微镜（Laser scanning confocal microscope,LSCM）观察细胞凋亡情况及中性红染色检测细胞的增殖情况,从而评估构建的组织工程骨支架的生物相容性,为体内模型植入奠定前期实验基础;（2）建立裸鼠皮下异位成骨模型,将构建的组织工程骨支架分别于植入皮下6周、12周后取材,进行组织切片染色,观察成骨方式及检测成骨相关基因的表达;（3）FVB/N小鼠建立股骨中段约3 mm的大段骨缺损模型,将含有CNPs的组织工程骨植入小鼠体内12周后取材,microCT观察骨缺损修复情况,组织切片染色观察新骨生成方式,并检测成骨相关基因的表达。4.探究PEG修饰后的CNPs促进基于软骨内成骨的大段骨缺损修复的机制。我们前期研究表明CNPs可以促进DHX15的表达,而文献表明DHX15可以激活p38 MAPK信号通路,且p38 MAPK信号通路在BMSCs软骨及肥大分化过程中发挥关键作用。在本部分研究中,拟采用qRT-PCR及Western blot检测CNPs诱导BMSCs成软骨分化及肥大化过程中DHX15表达的变化;在软骨分化和肥大化分化过程中使用DHX15干扰质粒,qRT-PCR,免疫荧光,Western blot检测DHX15的作用;使用干扰质粒后加入CNPs,qRT-PCR、免疫荧光、Western blot检测CNPs能否通过影响DHX15的表达调控BMSCs的软骨分化及肥大化,继而调控软骨内成骨进程。研究结果:1.我们通过微乳液法稳定合成CNPs,且粒径平均大小维持在3 nm,PEG修饰后CNPs能更好的分散在溶剂中。2.BMSCs软骨分化实验表明,CNPs能促进软骨相关基因Sox9、COMP、Col2a1及肥大相关基因Runx2、MMP13、Col10a1的表达;BMSCs成骨分化实验表明,CNPs抑制钙结节和碱性磷酸酶的形成及成骨相关基因Runx2、Osterix2、Col1a1的表达;BMSCs成脂分化实验表明,CNPs能抑制脂滴的形成及成脂相关基因PPARγ、C/EBPα、C/EBPβ的表达。3.裸鼠皮下异位成骨实验表明,CNPs能促进血管形成和新骨生成。4.小鼠原位股骨中段大段骨缺损修复实验表明,CNPs能增强基于软骨内成骨的临界尺寸的骨缺损再生。5.DHX15能激活p38 MAPK的磷酸化,干扰DHX15将抑制BMSCs的软骨分化及肥大化,CNPs能促进DHX15的表达并部分回复下调的基因表达。结论:1.CNPs可以促进BMSCs的软骨分化及肥大化,抑制BMSCs的成骨分化和成脂分化。2.CNPs能通过软骨内成骨的方式促进裸鼠皮下异位成骨及原位大段骨缺损修复。3.DHX15是BMSCs软骨分化及肥大化过程中的调控因子,且DHX15通过激活p38MAPK磷酸化发挥调控作用。4.CNPs通过激活DHX15/p38 MAPK信号通路调控BMSCs的软骨分化和肥大化,以促进软骨内成骨进程。
张燕,肖皓亮,周映辉,刘舒颖,谢辉,盛志峰[5]（2017）在《不同固定和包埋方法对大鼠骨组织免疫组化结果的影响》文中研究表明目的探讨不同固定和包埋方法对大鼠骨组织完整性及免疫组化结果的影响。方法大鼠4只2%戊巴比妥钠麻醉,腹主动脉放血处死后立即取双下肢,室温下置于4%多聚甲醛中固定。所有标本固定后经10%乙二胺四乙酸（ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA）脱钙处理,待组织软化后进行石蜡包埋,根据固定时间和包埋方法将骨组织分为:左侧股骨整段包埋组,左侧胫骨整段包埋组,右侧股骨截断包埋组,右侧胫骨截断包埋组,各组骨组织均为4例,分别固定1、2、3和4 d,切片后行HE染色和免疫组织化学检测骨保护素（osteoprotegerin,OPG）蛋白的表达,比较各组间染色结果和OPG蛋白表达差异。结果 HE染色结果显示,整段包埋和截断包埋的骨组织骨髓腔及骨小梁周边组织结构保存完整;免疫组化结果显示,显微镜下OPG染色为深褐色细颗粒状,主要位于成骨细胞和骨髓基质干细胞胞质及细胞间质中。免疫组化染色吸光度值结果显示,整段包埋的股骨和胫骨中的OPG吸光度值,无论在固定1,2,3和4 d（4.52±0.3,4.42±0.4,8.66±0.3,0.21±0.1;6.45±0.5,6.09±0.2,9.66±0.4,0.08±0.1）均显着高于相应截断包埋的吸光度值,差异有统计学意义（P<0.05）;整段包埋的股骨和胫骨吸光度值均在固定3 d（8.66±0.3,9.66±0.4）时达到最高峰值,显着高于1、2和4 d的吸光度值,差异有统计学意义（P<0.05）。结论大鼠股骨和胫骨整段包埋和截断包埋均能较好地保存骨小梁组织结构,固定3 d为相对最佳固定时间。相比股骨,胫骨组织结构能够得到更好地保存,抗原性仍较好。
石瑾,张世超,范如意,邝欢,李俊杰,漆松涛[6]（2017）在《神经组织和颅骨的最佳脱钙方法研究》文中指出目的在不影响免疫组织化学染色以及HE染色结果的前提下探索不同钙化程度骨质的最佳脱钙时间以及脱钙方式。方法 23周和34周人胎儿颅骨及脑组织标本各一例,经预处理后,分别均分为四组,A组5%盐酸、B组10%盐酸、C组10%Ph=7.3的EDTA、D组10%Ph=9.0的EDTA,4组不同脱钙液中分别在37℃和60℃两种脱钙环境下处理30天,每5天取材一次,在大体标本上评估大头针穿刺骨组织难易度、骨组织硬度;石蜡标本中评估骨组织切片时对刀片损伤程度以及切片完整度,并对脑组织进行HE及免疫组织化学染色,观察切片镜下神经元细胞完整性、免疫组化染色情况评估染色效果。结果强酸脱钙液脱钙效果强于EDTA溶液,但后者对细胞结构及蛋白保护更有益处。对于强酸脱钙液,更高的浓度及温度可大幅加快脱钙进程,短时间脱钙虽然造成细胞溶解但不影响蛋白的免疫原性。更高p H以及温度的EDTA脱钙效果更差,且会对细胞结构产生不利影响。结论对于需要快速使用免疫组化技术示踪蛋白完成病理诊断的脑组织标本,可用5%盐酸常温下快速脱钙;颅骨和脑组织同时存在的标本可采用p H=7.3的10%EDTA在常温下脱钙,适用于需要同时观察组织微观结构及示踪蛋白的科学研究。
胡庆霞[7]（2017）在《微结构一致刚度不同的脱钙骨支架对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响》文中指出骨是一种有生命的器官,内有血液循环,具有一定的自我愈合修复能力,而由外伤、感染、肿瘤等造成的大块骨缺损至今仍未有有效的解决方法。骨组织工程被认为是目前治疗大段骨缺损最有希望的途径。基质力学影响干细胞的粘附、迁移、增殖和分化,然而现有的关于基质力学在支架材料构建方面的研究主要集中在二维（two-dimensional,2D）或者准三维（quasi-three-dimensional,quasi-3D）条件下,而且大部分3D支架的制备方法在改变基质刚度的同时也改变了其3D微结构,难以考察基质力学单一因素对干细胞生物学行为的影响。本文通过对3D脱细胞骨支架进行不同时长脱钙,构建了一种微结构一致而基质刚度不同的新型3D脱钙骨支架材料。首先离体考察了不同基质刚度脱钙骨支架对骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）细胞相容性以及成骨分化的影响,然后通过皮下埋植实验考察了不同基质刚度脱钙骨支架对细胞浸润、胶原纤维沉积以及内源性细胞成骨分化的作用。本文的主要研究内容和结果如下:（1）微结构一致基质刚度不同脱钙骨支架的制备及表征通过对脱细胞骨支架进行不同程度的脱钙处理,成功制备了微结构一致基质刚度不同的脱钙骨支架,该支架具有良好的孔径尺寸和孔隙率,并且保留了天然骨的细胞外基质成分。压缩实验所测得不同基质刚度脱钙骨支架的弹性模量分别为66.06±27.83 MPa（高刚度组）、26.90±13.16 MPa（中刚度组）和0.67±0.14 MPa（低刚度组）。微型计算机断层扫描（micro computede tomography,micro-CT）结果显示脱钙前和脱钙后支架的微结构并未发生显着性变化。（2）不同基质刚度脱钙骨支架在体外对MSCs细胞相容性及成骨分化的影响体外Live/dead染色显示不同基质刚度支架均有利于MSCs的粘附和生长。碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）染色、骨桥蛋白（osteopontin,OPN）和骨钙蛋白（osteocalcin,OC）的免疫组化染色表明在体外复合培养21天时低刚度组支架最有利于促进MSCs的成骨分化。（3）不同基质刚度脱钙骨支架在皮下对细胞浸润、胶原纤维沉积以及内源性细胞成骨分化的影响皮下埋植实验表明各组支架具有不同的细胞浸润能力,脱钙骨支架的细胞浸润能力优于脱细胞骨支架（对照组）。Masson染色显示皮下埋植4周低刚度组支架具有明显的促进胶原纤维生成和沉积的作用,而皮下埋植8周时,胶原纤维的生成和沉积进一步增强。免疫组化检测显示皮下埋植4周低刚度组支架促进OPN和OC阳性表达的能力最强。以上结果说明低刚度组支架更有利于促进内源性细胞的成骨分化。综上所述,本文制备的3D微结构一致基质刚度不同的骨组织工程支架在体外可以促进MSCs的粘附、生长和成骨分化,在皮下有利于细胞浸润、胶原纤维沉积,促进内源性细胞的成骨分化。本文结果为基质力学在3D支架材料方面的研究提供一新的构建方法。
沈溪明,何欣欣,吴东霞,陈耿标,王林[8]（2014）在《不同浓度和pH值EDTA脱钙液对下颌骨免疫组化结果的影响》文中提出传统骨组织脱钙常采用酸性液体,但易导致组织结构难以保持完整,影响病理学进一步诊断。骨组织用乙二胺四乙酸二钠（EDTA）作为脱钙液进行脱钙,能使骨组织中的蛋白抗原保持完好,组织细胞结构保持完整清晰。已有大量文献报道肯定了EDTA脱钙液的作用,但对EDTA脱钙液的适宜浓度和pH值报道不一[1,2]。本文旨在探讨不同浓度和pH值EDTA脱钙液对下颌骨组织HE形态和免疫组化结果的影响。
张大贵,林小芳,张普,周婵萍[9]（2012）在《三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响》文中指出目的探讨三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响。方法选择12例骨组织,随机分为3组。A组用14%硝酸脱钙液进行处理,B、C组分别用EDTA脱钙液、PLANK脱钙液进行处理,同时对CD3、CD68、Ki-67和TTF-1染色。结果室温条件下,硝酸脱钙液的脱钙时间最短,但对组织损伤最大。PLANK脱钙液和EDTA脱钙液脱钙效果较好,组织结构完整,形态清晰,免疫组化染色较好。结论室温条件下,三种脱钙液中PLANK脱钙液和EDTA脱钙液对骨组织脱钙及免疫组化染色效果较好。但由于EDTA脱钙液脱钙时间过长,PLANK脱钙液脱钙均匀,速度快,更适合用于临床病理检查。硝酸脱钙液脱钙最快,但是免疫组化染色效果较差。
陈洪伟,刘英群,温黎明,冯晓杰,李任[10]（2012）在《比较四种脱钙法对人牙免疫组化染色抗原性的影响》文中研究表明目的:比较四种脱钙方法对人牙牙体组织免疫组化染色抗原活性的影响。方法:40颗人牙随机分为四组,分别在微波、超声、微波-超声联合及常温下用10%乙二胺四乙酸二钠溶液（EDTA-2Na）脱钙。应用SABC免疫组化染色技术检测Ⅰ型胶原蛋白、纤维粘连蛋白在各组牙体组织中的表达情况。结果:在微波-超声联合组脱钙所需时间最短,且免疫组化染色效果最好﹙P<0.05﹚;微波组脱钙时间较超声组略短,但二者免疫组化染色效果无显着差异（P>0.05）。常温组所需脱钙时间最长且免疫组化染色效果最差。结论:微波-超声联合法脱钙速度较快,免疫组化染色效果较好,是一种较为理想的脱钙方法。
二、EDTA微波脱钙骨的免疫组化染色（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、EDTA微波脱钙骨的免疫组化染色（论文提纲范文）
（1）基于利福喷丁构建局部植骨递药系统及外周骨靶向递药系统的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 利福喷丁局部植骨递药系统及外周骨靶向递药系统的制备 |
| 1 研究内容与方法 |
| 1.1 利福喷丁局部植骨递药系统的制备 |
| 1.2 利福喷丁外周骨靶向递药系统的制备 |
| 1.3 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二部分 利福喷丁局部植骨递药系统及外周骨靶向递药系统的体外评价 |
| 1 研究内容与方法 |
| 1.1 利福喷丁局部植骨递药系统的体外评价 |
| 1.2 利福喷丁外周骨靶向递药系统的体外评价 |
| 1.3 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三部分 利福喷丁局部植骨递药系统及外周骨靶向递药系统的体内评价 |
| 1 研究内容与方法 |
| 1.1 利福喷丁局部植骨递药系统的体内评价 |
| 1.2 利福喷丁外周骨靶向递药系统的体内评价 |
| 1.3 统计分析 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 药物递送系统在结核病领域的研究现状和进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间获得的学术成果 |
| 个人简历 |
| 导师评阅表 |
（2）DDR2是骨膜成骨细胞和成骨祖细胞潜在的细胞表面标记物（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 ALP、DDR2和FSP-1 在肋骨骨膜的表达 |
| 1.实验材料与主要仪器 |
| 2.实验方法 |
| 3.实验结果 |
| 4.讨论 |
| 5.结论 |
| 第二部分 ALP、DDR2和FSP-1 在股骨骨膜的表达 |
| 1.实验材料与主要仪器 |
| 2.实验方法 |
| 3.实验结果 |
| 4.讨论 |
| 5.结论 |
| 第三部分 DDR2和FSP-1 阳性骨膜成骨细胞的成骨分化能力比较 |
| 1.实验材料与主要仪器 |
| 2.实验方法 |
| 3.实验结果 |
| 4.讨论 |
| 5.结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 在读期间发表论文 |
| 致谢 |
（3）多元个性化3D打印自体颅骨的实现及其修复兔颅骨极限缺损的骨再生研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 文献回顾 |
| 1 颅骨修复材料的临床应用现状 |
| 1.1 自体骨瓣 |
| 1.2 钛网 |
| 1.3 聚甲基丙烯酸甲酯 |
| 1.4 聚醚醚酮 |
| 2 颅骨再生研究进展 |
| 2.1 磷酸钙 |
| 2.1.1 羟基磷灰石 |
| 2.1.2 磷酸三钙 |
| 2.1.3 双相磷酸钙 |
| 2.2 硫酸钙 |
| 2.3 生物活性玻璃 |
| 2.4 同种异体/异种骨基质 |
| 2.4.1 脱细胞骨基质 |
| 2.4.2 脱钙骨基质 |
| 2.5 植入物的微观结构对骨再生的影响 |
| 2.6 间充质干细胞 |
| 3 颅骨修复材料制造工艺进展 |
| 3.1 颅骨修复材料的传统制造方式 |
| 3.2 3D打印在颅骨修复材料中的应用 |
| 3.2.1 3D打印在生物医学中的应用 |
| 3.2.2 3D打印颅骨修复材料现状 |
| 3.3.3 3D打印在颅骨再生中的研究进展 |
| 3.3.4 3D打印可再生自体颅骨展望 |
| 第一部分 3D打印自体骨个性化外形与结构实现及特性研究 |
| 引言 |
| 1 材料和仪器 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 材料 |
| 1.3 配置试剂 |
| 1.4 实验仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 兔自体颅骨骨瓣获取 |
| 2.2 自体骨粉及骨浆料制备 |
| 2.3 3D打印骨模型的个性化结构、外形实现 |
| 2.4 3D打印自体骨特性研究 |
| 2.5 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 自体骨粉得率 |
| 3.2 自体骨粉微观形貌及粒度分布 |
| 3.3 自体骨浆料的打印可行性 |
| 3.4 3D打印自体骨结构个性化实现及冰乙酸PCL墨水多样性应用 |
| 3.5 3D打印骨模型的外形个性化实现 |
| 3.6 3D打印自体骨的外观和微观结构 |
| 3.7 3D打印自体骨的力学强度 |
| 3.8 3D打印自体骨的生物安全性 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二部分 自体BMSCS的分离、培养及多细胞分化潜能鉴定 |
| 引言 |
| 1 材料和仪器 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 材料 |
| 1.3 配置试剂 |
| 1.4 实验仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 单核细胞分离、BMSCs纯化培养 |
| 2.2 体外诱导BMSCs向多种细胞分化 |
| 3 结果 |
| 3.1 BMSCs的生长特性 |
| 3.2 BMSCs的多细胞分化潜能鉴定 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第三部分 3D打印自体骨对自体BMSCS的细胞亲和性研究 |
| 引言 |
| 1.材料和仪器 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 配置试剂 |
| 1.3 实验仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 3D打印自体骨上自体BMSCs的种植 |
| 2.2 3D打印自体骨自体BMSCs细胞粘附实验 |
| 2.3 3D打印自体骨中自体BMSCs增殖实验 |
| 2.4 3D打印自体骨中自体BMSCs细胞活力实验 |
| 2.5 3D打印自体骨种植自体BMSCs后的SEM形态学观察 |
| 2.6 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 自体BMSCs在3D打印自体骨中的粘附率 |
| 3.2 自体BMSCs在3D打印自体骨中的增殖特性 |
| 3.3 自体BMSCs在3D打印自体骨中的细胞活力 |
| 3.4 自体BMSCs在3D打印自体骨中的细胞形态 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第四部分 3D打印自体骨中自体BMSCS的体外成骨能力研究 |
| 引言 |
| 1 材料和仪器 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 配置试剂 |
| 1.3 实验仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 ALP活性检测 |
| 2.2 成骨相关基因表达检测 |
| 2.3 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 ALP活性分析 |
| 3.2 成骨相关基因表达分析 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第五部分 多元个性化3D打印自体骨修复兔颅骨极限缺损的骨再生研究 |
| 引言 |
| 1 材料和仪器 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 材料 |
| 1.3 配置试剂 |
| 1.4 实验仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 兔颅骨极限缺损造模及自体BMSCs提取 |
| 2.2 多元个性化3D打印自体骨制备 |
| 2.3 多元个性化3D打印自体骨回植及取样 |
| 2.4 Micro-CT检测新骨矿化 |
| 2.5 组织病理学检测 |
| 2.6 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 取材标本大体观察 |
| 3.2 新生骨矿化分析 |
| 3.3 新生骨组织形态(HE染色分析) |
| 3.4 新生骨成熟度评价(Masson染色分析) |
| 3.5 新生骨特异性标志物表达(I型胶原、OCN免疫组化分析) |
| 3.6 新生骨血管化评价(v WF免疫荧光分析) |
| 3.7 新生骨特点总结 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 个人简历和研究成果 |
| 致谢 |
（4）纳米氧化铈促进基于软骨内成骨的大段骨缺损修复的研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 英文摘要 |
| 中文摘要 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 CNPs的合成及其对MSCs多向分化的影响 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 CNPs通过软骨内成骨进行大段骨缺损修复的研究 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 CNPs促进软骨内成骨的机制研究 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述 氧化铈纳米颗粒的合成方法及其在生物领域的应用 |
| 参考文献 |
| 攻读博士期间发表的论文 |
| 致谢 |
（5）不同固定和包埋方法对大鼠骨组织免疫组化结果的影响（论文提纲范文）
| 材料与方法 |
| 实验动物 |
| 试剂与器材 |
| 实验方法 |
| 统计学方法 |
| 结果 |
| 不同固定和包埋方法对骨组织结构的影响 |
| 不同固定和包埋方法对骨吸光度的影响 |
| 讨论 |
（6）神经组织和颅骨的最佳脱钙方法研究（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 标本选择与取材 |
| 1.2 相关试剂及设备 |
| 1.3 脱钙液配制及处理 |
| 1.4 实验方法 |
| 1.4.1 评估软组织细胞结构及蛋白表达 |
| 1.4.2 评估骨片脱钙满意度 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 不同脱钙条件对骨质的影响 |
| 2.2 不同脱钙条件对脑组织及染色的影响 |
| 2.3 综合分析 |
| 3 讨论 |
（7）微结构一致刚度不同的脱钙骨支架对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 1 绪论 |
| 1.1 问题的提出 |
| 1.2 国内外研究现状 |
| 1.2.1 基质材料微结构对骨修复的影响 |
| 1.2.2 基质刚度对骨修复的影响 |
| 1.2.3 2D与 3D不同刚度基质的制备 |
| 1.2.4 脱钙骨基质的研究进展 |
| 1.3 本文研究目的、意义及主要内容 |
| 1.3.1 本文研究目的及意义 |
| 1.3.2 本文研究的主要内容 |
| 1.3.3 技术路线 |
| 1.4 本实验创新点 |
| 2 不同基质刚度脱钙骨支架的制备及表征 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料与试剂 |
| 2.2.1 实验动物 |
| 2.2.2 实验试剂 |
| 2.2.3 实验仪器及耗材 |
| 2.2.4 主要实验试剂的配制 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 脱细胞骨制备 |
| 2.3.2 脱细胞骨的表征及筛选 |
| 2.3.3 钙含量测定 |
| 2.3.4 不同基质刚度脱钙骨支架力学性能测定 |
| 2.3.5 Micro-CT表征脱钙前后支架微结构 |
| 2.3.6 因子灭活 |
| 2.3.7 数据统计分析 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 H-E染色表征脱细胞骨支架 |
| 2.4.2 Micro-CT表征脱细胞骨支架 |
| 2.4.3 钙含量测定表征脱钙程度 |
| 2.4.4 压缩试验测定不同基质刚度脱钙骨支架的力学性能 |
| 2.4.5 Micro-CT表征脱细胞骨支架脱钙前后的微结构 |
| 2.5 讨论与分析 |
| 2.6 本章小结 |
| 3 不同基质刚度脱钙骨支架在体外对MSCs相容性及成骨分化的影响 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料与试剂 |
| 3.2.1 实验细胞 |
| 3.2.2 实验试剂 |
| 3.2.3 实验仪器及耗材 |
| 3.2.4 主要实验试剂的配制 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 细胞培养 |
| 3.3.2 细胞接种 |
| 3.3.3 Live/dead染色 |
| 3.3.4 ALP染色 |
| 3.3.5 免疫组化染色 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 细胞相容性检测 |
| 3.4.2 不同基质刚度脱钙骨支架在体外对MSCs成骨分化的影响 |
| 3.5 分析讨论 |
| 3.6 本章小结 |
| 4 不同基质刚度脱钙骨支架在皮下对细胞浸润以及成骨分化的影响 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料与试剂 |
| 4.2.1 实验动物 |
| 4.2.2 实验试剂 |
| 4.2.3 实验仪器及耗材 |
| 4.2.4 主要实验试剂的配制 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 皮下埋植实验用支架材料制备 |
| 4.3.2 不同基质刚度脱钙骨支架皮下埋植实验 |
| 4.3.3 大体观察 |
| 4.3.4 H-E染色 |
| 4.3.5 Masson染色 |
| 4.3.6 免疫组化染色 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.4.1 大体观察 |
| 4.4.2 H-E染色检测不同基质刚度脱钙骨支架对细胞浸润的影响 |
| 4.4.3 Masson染色检测不同基质刚度脱钙骨支架对胶原纤维沉积的影响 |
| 4.4.4 免疫组化染色检测不同基质刚度脱钙骨支架对内源性细胞成骨分化的影响 |
| 4.5 分析讨论 |
| 4.6 本章小结 |
| 5 结论及后续工作展望 |
| 5.1 主要结论 |
| 5.2 后续工作建议 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| A 作者在攻读硕士学位期间发表的论文目录 |
（8）不同浓度和pH值EDTA脱钙液对下颌骨免疫组化结果的影响（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 脱钙液的配制 |
| 1.3 脱钙方法 |
| 1.4 免疫组化 |
| 1.5 结果判断 |
| 1.6 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 各组脱钙时间和HE染色效果的比较 |
| 2.2 各组免疫组化染色效果的比较 |
| 3 讨论 |
（9）三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 标本选择 |
| 1.2 三种脱钙液 |
| 1.3 试剂和仪器 |
| 1.4 方法 |
| 1.4.1 脱钙处理 |
| 1.4.2 免疫组化染色步骤 |
| 1.4.3 免疫组化染色结果判定 |
| 1.5 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 不同脱钙液对骨组织脱钙时间及效果比较 |
| 2.1.1 脱钙时间 |
| 2.1.2 脱钙效果 |
| 2.1.3 对组织损伤 |
| 2.2 不同脱钙液脱钙对骨组织免疫组化染色结果比较 |
| 2.3 脱钙后免疫组化染色效果 |
| 3 讨论 |
（10）比较四种脱钙法对人牙免疫组化染色抗原性的影响（论文提纲范文）
| 1 材料和方法 |
| 1.1 材料: |
| 1.2 仪器试剂: |
| 1.3 脱钙液配制: |
| 1.4 方法: |
| 1.5 免疫组化染色: |
| 1.6 图像分析及统计学处理: |
| 2 结果 |
| 2.1 |
| 2.2 免疫组化染色结果: |
| 3 讨论 |
四、EDTA微波脱钙骨的免疫组化染色（论文参考文献）
- [1]基于利福喷丁构建局部植骨递药系统及外周骨靶向递药系统的研究[D]. 梁求真. 新疆医科大学, 2021(08)
- [2]DDR2是骨膜成骨细胞和成骨祖细胞潜在的细胞表面标记物[D]. 杨海丽. 广州医科大学, 2020(01)
- [3]多元个性化3D打印自体颅骨的实现及其修复兔颅骨极限缺损的骨再生研究[D]. 陈红庆. 中国人民解放军空军军医大学, 2019(06)
- [4]纳米氧化铈促进基于软骨内成骨的大段骨缺损修复的研究[D]. 李建美. 中国人民解放军陆军军医大学, 2019(03)
- [5]不同固定和包埋方法对大鼠骨组织免疫组化结果的影响[J]. 张燕,肖皓亮,周映辉,刘舒颖,谢辉,盛志峰. 中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志, 2017(06)
- [6]神经组织和颅骨的最佳脱钙方法研究[A]. 石瑾,张世超,范如意,邝欢,李俊杰,漆松涛. 中国解剖学会第六届全国解剖学技术学术会议论文汇编, 2017
- [7]微结构一致刚度不同的脱钙骨支架对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响[D]. 胡庆霞. 重庆大学, 2017(06)
- [8]不同浓度和pH值EDTA脱钙液对下颌骨免疫组化结果的影响[J]. 沈溪明,何欣欣,吴东霞,陈耿标,王林. 临床与实验病理学杂志, 2014(06)
- [9]三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响[J]. 张大贵,林小芳,张普,周婵萍. 中国现代医生, 2012(24)
- [10]比较四种脱钙法对人牙免疫组化染色抗原性的影响[J]. 陈洪伟,刘英群,温黎明,冯晓杰,李任. 中国美容医学, 2012(06)