异基因非整合肝-小肠联合移植

异基因非整合肝-小肠联合移植

一、同种异体非整块肝脏-小肠联合移植(论文文献综述)

朱凡,杨秋蒙[1](2017)在《中国器官移植“第一例”背后的故事》文中指出中国器官移植技术目前已经处于世界领先的水平,但今天的成果,无不是站在40年前第一代器官移植探索者的大胆尝试的基础上的。中国的心肝移植从瑞金医院起步——1977年10月21日,瑞金医院为一名42岁的男性肝癌晚期患者进行了肝移植手术。40年来,中国器官移植技术不断发展,目前已经走在世界先进行列。在我国,主管部门对器官移植手术的开展依然非常谨慎。2007年,国家卫计委规范全国器官移植开展,直到2013年,

许翼麟[2](2012)在《干细胞融合与胃癌发生和进展的实验研究》文中指出本课题在建立雌雄嵌合体小鼠模型的基础上通过多因素联合攻击法建立嵌合体小鼠胃癌模型并通过Y染色体荧光原位杂交(FISH)检测是否发生细胞融合。通过机械法联合酶消化化学法分离小鼠胃粘膜上皮细胞,并通过免疫磁珠法分选骨髓源干细胞,最终通过化学融合法(聚乙二醇)将此两种细胞进行体外融合实验及培养。同时分离培养脐带血间充质干细胞(CB-MSCs)及人正常胃粘膜上皮细胞系(GES-1)并通过化学融合法(聚乙二醇)将此两种细胞进行体外融合实验并进行相关检测。以研究骨髓源性干细胞融合在小鼠胃癌发生与发展过程中的作用。第一部分雌雄嵌合体小鼠模型的建立及诱癌实验目的:通过雌雄嵌合体小鼠胃癌模型了解骨髓源干细胞在胃癌发生及进展过程中的作用。方法:采用雌性C57BL/6-GFP转基因小鼠为供体、雄性C57BL/6小鼠为受体通过性别交叉骨髓移植建立雌雄嵌合体小鼠。分别于术后1w及4w取嵌合体小鼠骨髓及外周血行流式细胞术鉴定骨髓移植模型是否成功,同时通过荧光显微镜观察骨髓移植后GFP+细胞在不同组织器官中的分布。在雌雄嵌合体小鼠基础上采用多因素联合攻击法建立嵌合体小鼠胃癌模型,并通过HE染色法及CK-18免疫组化法确定小鼠成瘤情况,同时采用Y染色体荧光原位杂交检测是否存在细胞融合。结果:小鼠骨髓移植术后小鼠存活率100%,流式细胞术结果示骨髓移植术后1周嵌合体小鼠骨髓GFP+细胞为(7.48±1.38)%,术后4周为(73.92±5.57)%。嵌合体小鼠外周血检测T细胞亚群结果显示1wk时仅有少量GFP+细胞且CD8+细胞恢复较CD4+细胞快,4wk时GFP+细胞升高、但CD4+细胞仍较少。嵌合体小鼠经多因素联合攻击法诱癌后总体存活率为72.9%(35/48)。诱癌后18.2%(2/11)小鼠诱发重度不典型增生及25.0%(3/12)小鼠成功诱发胃癌,其中2只腺癌、1只鳞癌。荧光显微镜结果示嵌合体小鼠正常胃组织可见少量GFP表达,而嵌合体小鼠非典型增生胃组织可见大量GFP表达。嵌合体小鼠嵌合体小鼠肾,脑,肝及脾组织中均可见不同程度GFP表达。通过Y染色体FISH检测结果示嵌合体小鼠正常胃组织于间质部位可见少量GFP表达,但均未见GFP及Y染色体双阳性细胞。嵌合体小鼠胃癌癌前病变及胃癌组织中均存在GFP及Y染色体双阳性细胞,但胃癌癌前病变组织中双阳性细胞比例较胃癌组织高。结论:通过性别交叉骨髓移植成功构建雌雄嵌合体小鼠模型,并通过多因素联合攻击法成功诱导小鼠胃部炎症、胃癌前病变及胃癌。骨髓源干细胞参与了不同脏器器官中血管内皮细胞的生成与更新。胃粘膜损伤早期及癌前病变时骨髓源干细胞参与胃粘膜组织的修复且部分细胞与胃粘膜细胞发生融合。当肿瘤发生时大量骨髓源性干细胞参与胃黏膜上皮细胞的修复后可取代原有胃黏膜上皮细胞且细胞融合减少。第二部分小鼠骨髓源干细胞与胃粘膜上皮细胞体外融合实验目的:通过小鼠骨髓源性干细胞与原代胃黏膜上皮细胞体外融合探讨骨髓源性干细胞融合参与肿瘤形成的可能机制。方法:通过机械法联合化学消化法分离胃粘膜上皮细胞并采用免疫荧光法鉴定细胞表型。通过免疫磁珠分离纯化小鼠骨髓谱系抗原阴性细胞,并通过流式细胞术检测细胞纯度。后通过聚乙二醇化学融合法进行小鼠骨髓源性干细胞与小鼠胃黏膜上皮细胞的细胞融合实验并通过流式细胞术检测细胞融合率并进行融合细胞的分选。结果:通过机械法联合化学消化法分离小鼠胃黏膜上皮细胞,每只小鼠腺胃部分可获得(5.27±2.92×106)个细胞、细胞活力为(97.05±2.20%)。其增殖在7天达到最佳状态,且角蛋白-18(Cytokeratin-18,CK-18)免疫荧光阳性率为(93.21±3.35)%。通过胫骨及股骨可分离出(8.88±4.22×107)个骨髓细胞、细胞活力为(98.35±1.23)%。以(4.43±2.47×107)个骨髓细胞进行免疫磁珠Lin-细胞分选可分出(1.36±1.03×106)个Lin-骨髓细胞。通过FCM检测分选前骨髓细胞Lin+细胞比例为76.21±4.89%、分选后磁珠标记的Lin+细胞比例为(69.23±5.79)%、分选后磁珠未标记Lin-细胞比例为(93.93±3.35)%。胃粘膜上皮细胞通过CFSE绿色荧光染色后可见细胞均表达绿色荧光,Lin-及Lin+骨髓细胞通过PKH26红荧光染色后细胞均表达红色荧光。两种细胞混合培养后未见细胞融合。PEG融合后荧光显微镜观察可见细胞融合,通过流式细胞术检测细胞融合率为(5.77±1.91)%。结论:通过机械法联合化学消化法成功分离小鼠胃粘膜上皮细胞,且其增殖在第7天达到最佳状态。通过免疫磁珠法成功分离小鼠骨髓Lin-细胞。通过PEG化学融合法成功融合小鼠胃粘膜上皮细胞及小鼠骨髓Lin-细胞。但因小鼠骨髓源干细胞及胃粘膜细胞均为原代细胞,融合后未造成细胞的转化,子代细胞未获得持续增殖的表型,另一方面可能因为融合效率较低,细胞融合致细胞表型改变的效率也较低,即使融合造成少量细胞的转化,在实验系统中未能观察到。第三部分人脐血间充质干细胞与人胃粘膜上皮细胞体外融合实验目的:通过人脐血间充质干细胞(CB-MSCs)与人正常胃粘膜上皮细胞系(GES-1)体外融合探讨间充质干细胞融合参与上皮细胞恶性转化的可能及肿瘤干细胞的起源。方法:体外培养GES-1细胞并通过免疫荧光染色鉴定CK-18在GES-1细胞表达情况。分离脐血单个核细胞进行脐血来源间充质干细胞的培养并探索其培养条件,观察脐血间充质干细胞生长特性。通过流式细胞分析脐血间充质干细胞表型分子Thy-1(CD90)、SH2(CD105)、SH4(CD73)、HLA-ABC、HLA-DR、CD34、CD45等的表达。通过聚乙二醇化学融合法进行CB-MSCs与GES-1的细胞融合实验并通过流式细胞术分选融合细胞。观察融合细胞生长特性,通过免疫荧光鉴定融合细胞CK-18表达情况。通过流式细胞术检测细胞融合率、表面抗原CD90表达情况及DNA倍体分析,通过划痕实验及侵袭实验检测融合细胞的迁移及侵袭能力,并通过MTT细胞增殖实验检测细胞增殖率。BALB/c裸鼠皮下注射融合细胞检测融合细胞成瘤率。结果:脐带血可分离并培养出CB-MSCs、其第一代形态为圆形及梭形,传代后为纺锤形及多角形且贴壁能力增强、具有很强的自我更新能力,本实验观察其可在体外传至25代。通过流式细胞技术分析CB-MSCs细胞表面免疫表型特征为:SH2(CD105)、SH4(CD73)、HLA-ABC强阳性,CD90弱阳性,、HLA-DR、CD45、CD34阴性。CB-MSCs及GES-1细胞经聚乙二醇体外融合后可通过流式细胞仪分选融合细胞、其融合率为8.7%。融合细胞形态不规则且可见巨大融合细胞,两周后细胞开始增殖、生长迅速且可稳定传代。免疫荧光检测CK-18显示融合细胞胞浆高表达CK-18,且形态发生改变,细胞核增大,胞浆减少,呈现恶性肿瘤细胞特性。流式检测显示融合细胞表达CD90,而DNA倍体分析结果示融合细胞为多倍体及非整倍体细胞且随细胞代数的增长、非整倍体细胞所占比例增加。MTT结果显示融合细胞增殖活性较GES-1明显增强,并获得向基质胶侵袭的能力且其迁移与侵袭能力均有所增强。裸鼠皮下成瘤实验显示融合细胞可形成带有腺体结构的上皮源性肿物。结论:成功分离并培养出脐带血间充质干细胞,且通过PEG体外与GES-1融合后通过流式细胞成功分选出融合细胞。细胞融合后形态及表型均发生改变,细胞形态呈典型肿瘤细胞且兼具GES-1及MSCs二者的表型、即胞浆表达CK-18且其表面抗原CD90阳性。融合细胞增殖活性较GES-1明显增强,并获得向基质胶侵袭的能力且其迁移与侵袭能力均有所增强。融合细胞与GES-1及MSCs相比可形成皮下肿物。

李元新[3](2012)在《肝小肠联合移植》文中研究指明肠功能衰竭患者长期依赖全肠外营养(totalparenteral nutrition,TPN)维持生存,一部分患者可因TPN发生肝功能障碍,甚至肝功能衰竭,如果这部分患者继续应用TPN维持生命,他们的平均生存时间只有6~12个月。肝小肠联合移植成为挽救这部分患者生命的治疗措施。根据全球小肠移植登记中心(ITR)2009年的定义:(1)肝小肠联合移植必须同时包含小肠和肝脏,但不包括胃;(2)腹腔多器官簇移植必须同时包含

张及禄[4](2011)在《小鼠移植物抗宿主病的治疗及初步机理探讨》文中研究说明急/慢性移植排斥反应是影响移植物长期存活的最主要障碍。寻找更加良好和特异的方法防止和(或)阻断移植物抗宿主病(graft-versus-host disease,GVHD)的发生与发展,将是器官移植领域面临的重要课题。本研究发现:小鼠急性GVHD (acute GVHD, aGVHD)的发生伴随有补体系统的过度活化,抗体中和小鼠体内过量的补体活化产物C5a能减少炎性细胞的浸润,降低体内炎性细胞因子的分泌表达,从而一定程度地延长aGVHD小鼠的存活时间。另一方面,对慢性移植排斥反应诱导的小鼠肾炎模型的研究证实,效应T细胞(Teff)↑/调节性T细胞(Treg)↓免疫失衡是诱导小鼠疾病发生的关键,靶向T细胞的传统免疫抑制剂抗抗CD3单克隆抗体免疫治疗能够通过上调Treg,从而抑制移植效应T细胞(Thl, Th2及Thl7)的活化,减轻慢性GVHD (chronic GVHD, cGVHD)对小鼠的肾脏损伤。总之,我们的研究工作为发现治疗GVHD的新靶点,阐明GVHD治疗机理以及临床上GVHD的辅助治疗提供了一定的理论基础。

李元新,李宁[5](2008)在《单独小肠移植和腹腔多脏器移植进展》文中研究表明

朱亮,李幼生,黎介寿[6](2007)在《小肠移植的研究进展》文中提出过去20年小肠移植取得了显着进展,现在小肠移植不再是一项被认为成实验性的技术,而是治疗不可逆肠衰竭的可行选择.国际小肠移植登记处(internatiorlal intestinal transplant registry,ⅡTR)数据显示开展的移植手术持续增加,已达每年180例,移植肠和移植患者的一年存活率均达到80%.但感染和排斥反应仍然是术后治疗过程中遇到的最棘手问题.我们简要概括了小肠移植领域的最新进展,包括适应症、受体的评价、外科技术、免疫抑制、排斥和感染.

李元新,李宁[7](2005)在《腹部联合脏器切除与器官移植进展》文中研究指明

李朝阳[8](2005)在《未成熟DC体外扩增诱导大鼠小肠移植免疫耐受的实验研究》文中研究说明【目的】 旨在通过体外扩增培养大鼠未成熟DC,体内输入受体,了解小肠移植后免疫耐受诱导情况,为减轻临床小肠移植后强烈的免疫排斥反应提供新的思路和途径。 预期目标:(1)大鼠未成熟DC体外培养扩增条件;(2)大鼠未成熟DC细胞诱导小肠移植免疫耐受的可行性;(3)大鼠供、受体未成熟DC诱导大鼠小肠移植免疫耐受的异同:(4)骨髓来源和肝脏来源的未成熟DC诱导大鼠小肠移植免疫耐受的异同。 【方法】 成年雄性近交系SD大鼠、Wistar大鼠(共体或受体),分离大鼠股骨骨髓细胞,加大鼠来源细胞因子粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte macrophage colony,GM-CSF)或粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子+转化生长因子β1(transforming growth factor betaone,TGF β1),培养5~9天收集骨髓来源DC。经门静脉插管胶原酶二步循环灌流法及Percoll不连续密度梯度离心法分离肝源DC,加细胞因子GM-CSF/或GM-CSF+TGF β1,培养5~9天收集肝脏来源DC。DC培养不同时间通过光镜观测、扫描电镜观测、流氏细胞术(FCM)检测DC表型、四甲基偶氮唑盐法(MTT)检测DC刺激同种异体大鼠淋巴细胞增殖能力来判定DC的成熟状态及功能。将收集的不同细胞因子培养的骨髓和肝脏来源的未成熟DC经阴茎背静脉输入受体Wistar大鼠体内(2×108细胞/只),1周后建立SD→Wistar同种异基因大鼠并列式小肠移

李幼生,李宁,李元新,倪小冬,朱亮,曹斌,李为苏,罗开,黎介寿[9](2005)在《非整块肝脏和小肠联合移植的外科技术(附一例报告)》文中研究说明目的 介绍国内首例非整块肝脏和小肠联合移植的外科技术。方法 采用在体灌注、整块切取的方法获取肝脏和小肠,供者器官采用 UW液保存。将供者肝脏、小肠联合植入短肠综合征合并胆汁淤积的男性受者体内,供肝采用改良背驮式肝移植术;供肠的动脉、静脉分别与受者的肾下腹主动脉和下腔静脉吻合。结果 至术后2个月时,移植小肠和肝脏均无排斥反应,肠黏膜结构正常,对肠内营养耐受良好;CT示移植肝形态正常,复查肝功能完全恢复正常。结论 选择性应用非整块肝脏和小肠联合移植术是安全有效的,特别适合需要接受肝脏、小肠联合移植的成年患者。

尹路,彭承宏,周光文,沈柏用,陈皓,申川,严佶祺,陈桂明,陈辉星,吴伟顶,李宏为[10](2004)在《肝肠器官簇移植1例报告》文中研究指明

二、同种异体非整块肝脏-小肠联合移植(论文开题报告)

(1)论文研究背景及目的

此处内容要求:

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例:

本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。

(2)本文研究方法

调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

三、同种异体非整块肝脏-小肠联合移植(论文提纲范文)

(2)干细胞融合与胃癌发生和进展的实验研究(论文提纲范文)

中文摘要
Abstract
缩略语/符号说明
前言
    研究现状、成果
    研究目的、方法
一、雌雄嵌合体小鼠模型的建立及诱癌实验
    1.1 对象和方法
        1.1.1 实验动物
        1.1.2 主要实验材料和试剂
        1.1.3 主要实验仪器
        1.1.4 实验步骤技术路线图
        1.1.5 实验原理和方法
    1.2 结果
        1.2.1 雌雄嵌合体小鼠模型的建立
        1.2.2 嵌合体小鼠胃癌模型的建立
        1.2.3 小鼠Y染色体FISH检测结果
    1.3 讨论
        1.3.1 骨髓源性干细胞
        1.3.2 针对本实验结果的讨论
    1.4 小结
二、骨髓源干细胞与胃粘膜上皮细胞体外融合实验
    2.1 对象和方法
        2.1.1 实验动物
        2.1.2 主要实验材料和试剂
        2.1.3 主要实验仪器
        2.1.4 实验步骤技术路线图
        2.1.5 实验原理和方法
    2.2 结果
        2.2.1 原代胃粘膜上皮细胞的培养
        2.2.2 小鼠Lin~-骨髓源性干细胞的分选
        2.2.3 小鼠胃粘膜上皮细胞与小鼠骨髓源性Lin~-细胞的融合
    2.3 讨论
        2.3.1 小鼠胃黏膜上皮细胞分离,鉴定与原代培养
        2.3.2 小鼠骨髓源性干细胞的分离与纯化
        2.3.3 细胞融合与肿瘤
    2.4 小结
三、脐带血间充质干细胞与胃粘膜上皮细胞体外融合实验
    3.1 对象和方法
        3.1.1 实验用细胞系
        3.1.2 主要实验材料和试剂
        3.1.3 主要实验仪器
        3.1.4 实验步骤技术路线图
        3.1.5 实验原理和方法
    3.2 结果
        3.2.1 人胃黏膜细胞GES-1培养及鉴定
        3.2.2 脐带血间充质干细胞培养及鉴定
        3.2.3 人脐带血间充质干细胞及胃黏膜上皮细胞融合实验
        3.2.4 融合细胞CK-18鉴定
        3.2.5 融合细胞流式鉴定
        3.2.6 融合细胞DNA倍体分析
        3.2.7 融合细胞增殖实验
        3.2.8 融合细胞划痕迁移实验
        3.2.9 融合细胞Transwell细胞迁移与侵袭实验
        3.2.10 裸鼠体内成瘤实验
    3.3 讨论
        3.3.1 人胃黏膜细胞GES-1
        3.3.2 脐带血间充质干细胞的分离、培养及鉴定
        3.3.3 细胞融合与肿瘤干细胞
        3.3.4 细胞融合与上皮细胞间质样变
        3.3.5 针对本实验结果的讨论
        3.3.6 展望
    3.4 小结
全文结论
论文创新点
参考文献
发表论文和参加科研情况说明
综述
    骨髓源性干细胞与肿瘤干细胞
    综述参考文献
致谢

(4)小鼠移植物抗宿主病的治疗及初步机理探讨(论文提纲范文)

内容提要
中文摘要
Abstract
英文缩略词表
第1章 绪论
第2章 抗C5A多克隆抗体在AGVHD中的应用及机理研究
    第1节 小鼠AGVHD模型的建立、鉴定及补体系统的活化
        1 材料与方法
        2 结果
        3 讨论
        4 小结
    第2节 抗C5A多克隆抗体对小鼠AGVHD的治疗作用
        1 材料和方法
        2 结果
        3 讨论
        4 小结
第3章 CD3 MAB在CGVHD中的应用及机理研究
    第1节 小鼠cGVHD模型的建立及鉴定
        1 材料与方法
        2 结果
        3 讨论
        4 小结
    第2节 CD3 MAB的疗效评价及机理探讨
        1 材料与方法
        2 结果
        3 讨论
    4 小结
全文总结
参考文献
附录
作者简介及在学期间所取得的科研成果
致谢

(5)单独小肠移植和腹腔多脏器移植进展(论文提纲范文)

1 外科技术的进展
2 免疫抑制方案的进展
3 排斥反应监测与治疗的进展
4 感染的防治进展
5 腹腔多脏器移植取代肝小肠联合移植的趋势
6 肠衰竭治疗的天平开始由家庭肠外营养 (HPN) 向小肠移植倾斜

(6)小肠移植的研究进展(论文提纲范文)

0 引言
1 历史和现状
2 适应症
3 受体的评价
4 外科技术
5 免疫抑制和排斥
6 感染
■膂名资料
■岈波嗡沿
■相奚根道
■?1斯盘点
■右用要点
■名嗍斛_
■阉行评价

(8)未成熟DC体外扩增诱导大鼠小肠移植免疫耐受的实验研究(论文提纲范文)

中文摘要
英文摘要
符号说明
前言
材料与方法
结果
讨论
结论
附图与表格
参考文献
综述
致谢
攻读学位期间发表的学术论文目录

(10)肝肠器官簇移植1例报告(论文提纲范文)

临床资料
    一、一般资料
    二、手术方法
        1. 供体手术:
        2. 供体修整:
        3. 受体手术:
    三、免疫抑制剂的使用
        1. FK506(普乐可复):
        2. MMF(醋酚麦考酯,骁悉):
        3. SIMULECT(巴利昔单抗,舒莱):
        4. 甲基泼尼松龙:
    四、术后营养:
结果
讨论
    一、手术体会
        1. 整块移植:
        2. 供受体双桥接血管(conduit)吻合:
    二、免疫抑制

四、同种异体非整块肝脏-小肠联合移植(论文参考文献)

  • [1]中国器官移植“第一例”背后的故事[J]. 朱凡,杨秋蒙. 新民周刊, 2017(40)
  • [2]干细胞融合与胃癌发生和进展的实验研究[D]. 许翼麟. 天津医科大学, 2012(02)
  • [3]肝小肠联合移植[J]. 李元新. 中华消化外科杂志, 2012(01)
  • [4]小鼠移植物抗宿主病的治疗及初步机理探讨[D]. 张及禄. 吉林大学, 2011(09)
  • [5]单独小肠移植和腹腔多脏器移植进展[J]. 李元新,李宁. 中国实用外科杂志, 2008(01)
  • [6]小肠移植的研究进展[J]. 朱亮,李幼生,黎介寿. 世界华人消化杂志, 2007(29)
  • [7]腹部联合脏器切除与器官移植进展[J]. 李元新,李宁. 中国实用外科杂志, 2005(08)
  • [8]未成熟DC体外扩增诱导大鼠小肠移植免疫耐受的实验研究[D]. 李朝阳. 山东大学, 2005(08)
  • [9]非整块肝脏和小肠联合移植的外科技术(附一例报告)[J]. 李幼生,李宁,李元新,倪小冬,朱亮,曹斌,李为苏,罗开,黎介寿. 中华器官移植杂志, 2005(02)
  • [10]肝肠器官簇移植1例报告[J]. 尹路,彭承宏,周光文,沈柏用,陈皓,申川,严佶祺,陈桂明,陈辉星,吴伟顶,李宏为. 外科理论与实践, 2004(06)

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异基因非整合肝-小肠联合移植
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